小鼠著床位點基因表達系列分析.pdf

1、胚胎著床涉及胚胎和子宮之間一系列復(fù)雜的相互作用，許多基因參與其中。盡管已利用寡核苷酸芯片、cDNA芯片、DDRT-PCR等各種不同的技術(shù)篩選到一些著床相關(guān)基因，但胚胎著床的機制仍不清楚。為了全面了解胚胎著床相關(guān)分子和發(fā)現(xiàn)新的胚胎著床相關(guān)信號通路，我們首次應(yīng)用基因表達系列分析(SAGE)技術(shù)，分析了小鼠早期妊娠第五天非著床位點和著床位點子宮的基因表達譜。 我們利用早期妊娠小鼠第五天的子宮分別構(gòu)建了非著床位點和著床位點標(biāo)簽長10bp

2、的兩個SAGE文庫，非著床位點測序的標(biāo)簽數(shù)為51306個，對應(yīng)16964個特異標(biāo)簽，著床位點測序的標(biāo)簽數(shù)為53214個，對應(yīng)16733個特異的標(biāo)簽。為了提高SAGE庫中標(biāo)簽對應(yīng)基因的比例，我們利用同一個SAGE文庫的序列文件，構(gòu)建了標(biāo)簽長11bp的兩個文庫，非著床位點的標(biāo)簽總數(shù)為48121，對應(yīng)16677個特異標(biāo)簽，著床位點的標(biāo)簽總數(shù)為50227，對應(yīng)16696個特異的標(biāo)簽。共有1039個標(biāo)簽在非著床位點特異性表達，1252個標(biāo)簽在著床

3、位點特異性表達。根據(jù)p值，195個標(biāo)簽在非著床位點顯著上調(diào)，其中100個標(biāo)簽是單一匹配的，261個標(biāo)簽在著床位點顯著上調(diào)，其中127個是單一匹配的。 為了驗證SAGE結(jié)果的可信性，我們隨機選取14個單一匹配的標(biāo)簽對應(yīng)的基因(其中7個在著床位點上調(diào)，7個下調(diào))進行RT-PCR驗證，所有這些基因的RT-PCR結(jié)果與SAGE結(jié)果中的表達趨勢一致。我們利用原位雜交對SAGE結(jié)果也進行了驗證。與非著床位點相比，1810014L12Rik、

4、Psmb5、Cd63、Npm1、Fads3和Tagln2在著床位點處的腔上皮下基質(zhì)細(xì)胞中高表達。Ddx39在第5天著床位點腔上皮下基質(zhì)中強表達，在非著床位點及假孕第5天未檢測到雜交信號。利用假孕及延遲著床模型發(fā)現(xiàn)，Ddx39的表達受正在著床的活性胚泡的誘導(dǎo)。在卵巢切除的小鼠中，Ddx39的表達受雌激素顯著上調(diào)，孕酮對Ddx39的表達沒有明顯影響。這表明Ddx39可能在胚胎著床過程中發(fā)揮重要作用。 總之，我們成功地構(gòu)建了早期妊娠小