四點(diǎn)彎曲應(yīng)力刺激對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖活性的影響.pdf

1、目的：觀察四點(diǎn)彎曲應(yīng)力刺激對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖活性以及細(xì)胞周期的影響。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)于2010.9-2011.3在大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院中英再生醫(yī)學(xué)中心完成。
　　 1．使用全骨髓培養(yǎng)法分離人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。進(jìn)行原代培養(yǎng)，擴(kuò)增后備用。
　　 2．利用四點(diǎn)彎曲應(yīng)力細(xì)胞加載儀(四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)院與電子科技大學(xué)聯(lián)合研制，專利號：(CN2534576 and CN1425905)，取第4～6代細(xì)胞接種于加力

2、板(BDNo.353135)，行爬片處理。分組：空白組，不加力；實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組頻率均為0.5HZ，加力60min，分別受張應(yīng)力1000μstrain、3000μstrain、5000μstrain的機(jī)械信號刺激，空白組不受力學(xué)信號刺激，其他培養(yǎng)條件與實(shí)驗(yàn)組一致。
　　 3．細(xì)胞行力學(xué)干預(yù)后，用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、排列。分別用四甲基偶氮唑細(xì)胞計(jì)數(shù)法、流式細(xì)胞儀周期分析、共聚焦顯微鏡檢測鈣離子含量來測量細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期。所

3、有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次。
　　 4．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示，使用SPSS16.0軟件包進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1．利用離心法結(jié)合全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)細(xì)胞增殖迅速，傳代穩(wěn)定。
　　 2．四點(diǎn)彎曲應(yīng)力細(xì)胞加載儀性能穩(wěn)定，準(zhǔn)確，培養(yǎng)板未出行裂痕，變形等情況。細(xì)胞接種加力板后12～24h貼壁，貼壁良好，24h后細(xì)胞覆蓋率約達(dá)8

4、0％～90%，無細(xì)菌污染現(xiàn)象，可適用于應(yīng)力刺激體外細(xì)胞效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 3．通過四甲基偶氮唑法細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測細(xì)胞增殖、流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期及PI指數(shù)，激光共聚焦顯微鏡鈣離子探針檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，發(fā)現(xiàn)適當(dāng)大小的機(jī)械應(yīng)力刺激對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖具促進(jìn)作用，其中3000μstrain的應(yīng)力刺激作用最明顯，過強(qiáng)的機(jī)械應(yīng)力刺激(5000μstrain)對細(xì)胞不具有促增殖效應(yīng)，并可能存在抑制作用。
　　 結(jié)論：適當(dāng)?shù)?/p>