淫羊藿苷在大鼠體內(nèi)促使骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向睪丸類間質(zhì)細(xì)胞分化的研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　 間質(zhì)細(xì)胞的功能在老年男性、糖尿病病人、接受放射治療的直腸癌病人中是逐漸下降的,人體內(nèi)雄激素合成和分泌的量就會減少,引起一系列相關(guān)癥狀。典型的疾病有老年遲發(fā)型性腺功能減退癥。另外先天性雄激素不足導(dǎo)致患有克氏綜合癥的患者達(dá)到152/10000。外源性雄激素的攝入就成了這些病人的常規(guī)治療方法,外源性睪酮的攝入在一定程度上也是有利于男性第二性征的維持和性功能障礙的恢復(fù)。另外,長時期補充雄激素治療不易達(dá)到理想的治療

2、效果,可能存在副作用和潛在的風(fēng)險。目前自體干細(xì)胞移植成為研究的熱點,干細(xì)胞移植后在自身的下丘腦-垂體-性腺軸調(diào)節(jié)下,通過自身反饋和負(fù)反饋相互作用的機制補充機體生理活動所需要的激素,從而避免激素過量和補充不足的問題。
　　 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是具有向多種中胚層細(xì)胞分化能力的成體干細(xì)胞。同時由于它可作為自體移植的源細(xì)胞,不存在倫理學(xué)的問題又能有效地避免免疫排斥反應(yīng)。而睪丸間質(zhì)細(xì)胞就起源于中胚層。兩者起源相同,共有許多相似的特性。最近的

3、研究發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能分化為睪丸類間質(zhì)細(xì)胞,主要是通過類固醇激素合成因子-1的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。有研究證實類固醇生成因子-1是一個主要的類固醇合成轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)的基因。而中藥單體淫羊藿苷是從淫羊藿中提取出來的黃酮類化合物。淫羊藿苷具有提高體內(nèi)睪酮的水平和促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)化的功能。本研究是觀察淫羊藿苷促使骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠睪丸內(nèi)向類間質(zhì)細(xì)胞分化中的作用。
　　 方法:4周齡SPF級雄性SD大鼠50只,體重約200g左右。采用隨

4、機數(shù)字表法平均分為5組,每組10只。分為A組正常對照組;B組照射對照組;C組移植干細(xì)胞組;D組移植后低劑量灌胃組和E組移植后高劑量灌胃組。A組正常飼養(yǎng),B、C、D、E組大鼠睪丸均接受60Coγ射線(6Gy+8GY)照射,分次照射時間間隔為24小時。C、D、E組大鼠在60Coγ射線照射完成1周后向大鼠睪丸組織中注射第九代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞0.1ml(規(guī)格1*10^6)。移植過骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的D組和E組大鼠分別用淫羊藿苷2mg/100g,5

5、mg/100g灌胃8周。8周后大鼠被處死,測量大鼠的體重。無菌條件下收集血液和睪丸組織并稱重。一部分睪丸組織用福爾馬林固定,用來做HE染色和免疫熒光分析。另一部分睪丸組織存放于-80℃冰箱中備行RT-PCR用。采用60Coγ射線照射大鼠睪丸致間質(zhì)細(xì)胞損傷模型,移植入帶有綠色熒光蛋白的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞于造模后的大鼠睪丸內(nèi),然后用中藥單體淫羊藿苷懸液灌胃8周。采用ELISA法檢測循環(huán)血清中的睪酮和黃體生成素。通過RT-PCR檢測睪丸組織中S

6、F-1和P450scc基因的轉(zhuǎn)錄水平。采用免疫熒光和共聚焦分析的方法檢測帶有GFP表達(dá)和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物P450scc的細(xì)胞。
　　 結(jié)果:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植組,尤其是高劑量淫羊藿苷灌胃組似乎可減輕60Coγ射線照射所致的損傷。免疫熒光和共聚焦分析顯示GFP陽性的移植細(xì)胞定位于睪丸的間質(zhì)中,在干細(xì)胞移植組和淫羊藿苷灌胃組中這些細(xì)胞同時表達(dá)P450scc。RT-PCR證實與照射對照組相比,在這些移植干細(xì)胞組中P450scc表達(dá)增加