補充硼對非洲鴕鳥雞脾、腎、肝發(fā)育的影響.pdf

1、本文分為以下幾個部分進行探討：
　　1.硼對脾的影響
　　在研究中檢測了硼對脾發(fā)育變化之間的關(guān)系和硼（以硼酸的形式）對Hsp40/70表達水平的影響。將30羽健康雛鴕鳥隨機分為6組:Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ組，分別飼喂添加0，40，80，160，320，640mg/L硼的基礎(chǔ)日糧。通過HE染色對脾組織進行病理學(xué)檢查;采用IHC和Western blot檢測技術(shù)分析Hsp40/70的表達水平;并通過實時熒光定量PCR(qPCR)

2、檢測Hsp40/70的mRNA表達水平。為了研究細胞凋亡，分析了所有處理組的TUNEL反應(yīng)。該部分研究工作的內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.1硼對鴕鳥脾組織結(jié)構(gòu)的影響
　　與Ⅰ組的結(jié)果相比，Ⅱ組沒有顯著性差異。與Ⅰ組比較，Ⅲ組和Ⅳ組白髓的數(shù)量和體積增多，邊緣區(qū)細胞密集增厚，邊界清晰。試驗組Ⅴ和Ⅵ組織病理學(xué)變化明顯;白髓的數(shù)量和體積減少，邊界不清晰。
　　1.2硼對Hsp40/70在雛鴕鳥脾中分布的影響
　　Hsp70主

3、要在脾臟組織中呈彌漫分布。與Ⅰ組的結(jié)果相比，Ⅱ組的Hsp70的分布無顯著性差異，但Ⅲ組，特別是飼喂添加160mg/L硼的Ⅳ組的Hsp70分布差異顯著。然而，高硼處理組的Hsp70陽性信號的分布開始下降，其在Ⅵ下降得猶為明顯。此外，與Ⅰ組相比，Ⅱ組中陽性信號IOD略有增加，但無顯著性差異;Ⅲ組和Ⅳ組中Hsp70陽性信號的IOD顯著性升高。然而，Ⅴ組陽性信號的IOD卻略有降低，但無顯著性差異，Ⅵ組陽性信號的IOD顯著性降低。通過蛋白免疫印跡

4、分析，Hsp70表達量水平與免疫組化結(jié)果的趨勢相似。隨著硼含量的增加，Hsp70s表達量也增加并在Ⅳ組中達到峰值。Hsp40的表達量的趨勢與Hsp70的相似;然而，與Hsp70相比，相同組中Hsp40的表達量較少。這表明Hsp40是Hsp70的輔因子，有助于Hsp70的活性。
　　1.3硼對鴕鳥脾Hsp40/70mRNA表達量的影響
　?、蚪M（40mg/L硼）中Hsp40/70的mRNA表達量水平高于Ⅰ組;Ⅲ組mRNA表達量

5、水平顯著升高;Ⅳ組mRNA表達量水平達到峰值，之后Hsp40/70的mRNA表達量水平開始下降;Ⅵ組的mRNA表達量水平最低，與Ⅰ組（對照組）相近。mRNA表達量下降，表明Hsp40/70mRNA表達量是呈現(xiàn)劑量依賴性的，最初在較低劑量下誘導(dǎo)表達，然后在較高量的硼處理組中被抑制。
　　1.4硼對鴕鳥脾細胞凋亡的影響
　　為了檢測硼對雛鴕鳥脾細胞凋亡的影響，采用TUNEL法評估細胞凋亡。TUNEL細胞主要是棕色顆粒的細胞。在Ⅱ

6、組，Ⅲ組和Ⅳ組中，TUNEL陽性信號弱于Ⅰ組;但在第Ⅴ組，特別是Ⅵ組（640mg/L硼）TUNEL陽性信號增強。IOD分析顯示Ⅱ-Ⅳ組水平較低，Ⅳ組最低;而與Ⅰ組相比，Ⅴ組和Ⅵ組的IOD水平顯著升高。
　　2.硼在腎臟組織發(fā)育中的作用
　　在本試驗中，研究了硼對雛鴕鳥腎的作用，特別是抗氧化能力。將48羽雛鴕鳥隨機分為6組，在飲用水中補充不同濃度的硼。測定相對氧化/抗氧化酶(T-AOC，MDA，GSH-Px，CAT，GR,SO

7、D)和腎細胞凋亡各項指標。通過qPCR測量該通路(Nrf2，HO-1和GCLC)中3個重要基因的表達，并通過免疫組化分析關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子Nrf2的定位。研究的相應(yīng)內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　2.1硼對雛鴕鳥腎組織凋亡的影響
　　凋亡的細胞分布在腎的各個部位，這些細胞基本上是棕色顆粒的細胞。與對照組相比，Ⅱ組和Ⅲ組凋亡細胞數(shù)量較少。飼喂添加160mg/L硼基礎(chǔ)日糧處理組凋亡細胞數(shù)量略有增加，當添加劑量達到320mg/L時凋亡細胞數(shù)明顯增

8、加，在640mg/L劑量時達到峰值。此外，IOD分析顯示Ⅱ組和Ⅲ組的水平較低，Ⅲ組水平最低，而與對照組相比，Ⅴ組和Ⅵ組IOD水平顯著升高。
　　2.2硼對雛鴕鳥腎組織抗氧化活性的影響
　　與對照組相比，添加40mg/L和80mg/L硼組MDA含量分別顯著降低了26.02％和48.12％，然而添加160-320mg/L硼時增加，640mg/L硼組增加了一倍。添加40mg/L硼組雛鴕鳥腎組織T-AOC活性與對照組相比沒有差異，添

9、加80mg/L硼組則明顯升高。相反，添加640mg/L硼組T-AOC活性顯著下降，與同組MDA含量變化相反。雛鴕鳥腎組織的GSH-PX活性在添加40和80mg/L硼組略有增加，但差異不顯著。然而，GSH-PX在添加160，320mg/L硼組顯著增加了約50％，添加640mg/L硼組增加了一倍。
　　2.3硼對雛鴕鳥腎組織Nrf2抗氧化通路的影響
　　研究結(jié)果表明，在低劑量硼組，Nrf2陽性產(chǎn)物主要分布在腎近端小管，而高劑量組

10、Nrf2陽性產(chǎn)物分布主要位于上皮細胞中。IOD分析顯示，低劑量組Nrf2陽性產(chǎn)物的分布較高，而與Ⅰ組相比，高劑量組的Nrf2陽性產(chǎn)物分布較少?？寡趸?Nrf2，HO-1，GCLc)中3個重要基因的qPCR分析顯示不同組之間相似而強烈的差異。與對照組相比，當添加硼達到160mg/L劑量時能顯著提高了雛鴕鳥腎組織中Nrf2的表達水平，添加80mg/L硼組達到峰值。除了添加40mg/L硼組外，其他添加硼組抗氧化通路GCLc表達量水平均顯著

11、升高，添加80mg/L硼組達到最大值。此外，與其他抗氧化因子相比，硼對雛鴕鳥腎組織中HO-1表達量水平的影響是最大的。
　　3.硼對肝臟功能的影響
　　在非洲鴕鳥飲用水中添加硼酸(0mg，40mg，80mg，160mg，320mg和640mg)，觀察并檢測雛鴕鳥肝中由不同劑量硼引起的組織學(xué)，細胞凋亡，組織化學(xué)和血清生化參數(shù)的變化。通過HE染色和PAS染色評估不同組的組織結(jié)構(gòu)變化;通過TUNEL檢測細胞凋亡情況;通過分光光度法

12、檢測血清生化指標。得到的結(jié)果如下:
　　3.1硼對肝組織結(jié)構(gòu)的影響
　　90羽鴕鳥肝顯示出良好的結(jié)構(gòu)，具有豐富的細胞數(shù)量和不同形狀的肝門管區(qū)。在低劑量硼組，進一步發(fā)現(xiàn)肝細胞發(fā)育良好，肝門管區(qū)清晰可見。在高劑量組中觀察到肝組織結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。與硼中毒有關(guān)的主要病變包括:肝門管區(qū)炎癥和肝細胞病變。肝門管區(qū)炎癥在Ⅵ組最嚴重。在肝組織的一些肝細胞中觀察到輕度癥狀，添加640mg/L硼劑量組中較多。此外，一些肝細胞還觀察到核皰化。同時，

13、還觀察到的部分的核固縮和壞死。
　　3.2硼對糖原含量的影響
　?、蚪M糖原含量高于Ⅰ組，Ⅲ組糖原含量最高，有顯著性差異。Ⅳ組可能是最佳劑量，之后糖原量開始下降。與Ⅰ組比較，在Ⅴ組和Ⅵ組中糖原含量最少。經(jīng)IOD分析證實了以上所述各組糖原水平。
　　3.3硼對雛鴕鳥肝細胞凋亡的影響
　　低劑量組顯示較少的細胞凋亡，Ⅱ組中細胞死亡最少。與Ⅰ組相比，高劑量組，特別是添加640mg/L硼組中肝細胞凋亡量較多。IOD的統(tǒng)計學(xué)

14、分析與本研究的TUNEL結(jié)果相似，表明硼對細胞凋亡具有劑量依賴性作用，并且添加超過160mg的硼劑量會使更多的細胞凋亡。
　　3.4硼對血清生化指標的影響
　　血清生化指標受硼劑量的影響顯著。高劑量組（添加320mg/L，特別是640mg/L硼組）酶活性參數(shù)與空白組相比差異顯著。同時，參與代謝的血清生化指標在低劑量組（至Ⅳ組）中顯示出硼有利的作用?？傮w結(jié)果表明硼在低劑量（80-160mg/L硼酸）對肝酶活性和代謝有正面的影響