健康成年人攜帶耐甲氧西林金黃色葡萄球菌分子生物學(xué)和抗生素耐性研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是世界范圍內(nèi)化膿感染中最常見(jiàn)的病原菌，能引起諸多局部化膿性、系統(tǒng)性感染疾病，甚至全身感染。近年來(lái)，耐多種抗生素的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA急劇增多并遍布全球，迅速成為世界范圍內(nèi)醫(yī)院感染的主要病原菌。不僅如此，健康人群MRSA攜帶率也在逐年攀升。我國(guó)是MRSA高度流行的國(guó)家，針對(duì)醫(yī)院來(lái)源的MRSA研究比較廣泛，但是對(duì)于社區(qū)健康人群攜帶的MRSA研究相對(duì)較少。通過(guò)對(duì)社區(qū)來(lái)源的

2、MRSA進(jìn)行耐藥性、分子分型、毒力基因檢測(cè)等方面的研究，有助于了解我國(guó)健康人群中MRSA菌株的流行病學(xué)現(xiàn)狀，為指導(dǎo)臨床合理用藥，制定感染預(yù)防和控制措施，最終延緩和減少耐藥現(xiàn)象提供流行病學(xué)和分子生物學(xué)參考依據(jù)。
　　目的：
　　1.描述山東省城市和農(nóng)村健康成年人金葡菌及MRSA攜帶率、spa型別、耐藥性等特征，為山東地區(qū)金葡菌及MRSA感染治療提供可靠依據(jù);
　　2.了解城市和農(nóng)村來(lái)源金葡菌耐藥性、spa型別、pvl基因

3、攜帶等方面的特征;
　　3.探索不同spa型別菌株耐藥性差異，尋找菌株耐藥性差異的分子來(lái)源。
　　方法：
　　1.使用平板培養(yǎng)基對(duì)金葡菌和MRSA進(jìn)行篩選，應(yīng)用飛行時(shí)間質(zhì)譜分析對(duì)所分離的金葡菌所屬種屬進(jìn)行驗(yàn)證，檢測(cè)DNA攜帶mecA基因的情況對(duì)分離的MRSA進(jìn)行鑒定;
　　2.采用96孔板稀釋法對(duì)所鑒定的金葡菌和MRSA菌株進(jìn)行青霉素、苯唑西林、頭孢西丁、萬(wàn)古霉素、克林霉素、四環(huán)素、達(dá)托霉素、環(huán)丙沙星、復(fù)方新諾明

4、等常用抗生素最小抑菌濃度檢測(cè)，結(jié)果用敏感(S)、中介敏感(I)和耐藥(R)表示;耐三種及以上藥物的菌株參照定義判定為多耐藥菌株MDR;并對(duì)結(jié)果進(jìn)行城鄉(xiāng)比較;
　　3.采用PCR法對(duì)分離株進(jìn)行spa分型，并將spa型別與樣本城鄉(xiāng)來(lái)源、耐藥性等因素進(jìn)行比較聯(lián)系;
　　4.采用PCR法對(duì)分離株進(jìn)行pvl攜帶檢測(cè)，并進(jìn)行城鄉(xiāng)比較;
　　5.使用Excel2016對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和匯總，使用STATA13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和繪圖。

5、
　　結(jié)果：
　　1.本研究共采集到有效鼻腔拭子樣本1241份，其中城市人群樣本473份、農(nóng)村人群樣本768份。共檢出金葡菌251株，檢出率20.23％，檢出MRSA33株，總檢出率2.66％。
　　2.MRSA中多耐藥菌株占87.88％，對(duì)青霉素、紅霉素、克林霉素、苯唑西林、四環(huán)素、頭孢西丁、氯霉素、環(huán)丙沙星、慶大霉素、鏈霉素500、復(fù)方新諾明、達(dá)托霉素、萬(wàn)古霉素的耐藥率分別為100.00％、93.94％、78.79

6、％、60.61％、57.58％、57.58％、39.39％、36.36％、33.33％、27.27％、3.03％、0.00％、0.00％,對(duì)氯霉素中介敏感率為51.52％。MSSA中多耐藥菌株占56.88％，對(duì)上述抗生素的耐藥率分別為89.45％、62.84％、41.74％、3.21％、25.69％、4.59％、15.60％、23.85％、10.09％、5.96％、22.48％、0.00％、0.00％，對(duì)氯霉素中介敏感率為63.30％。

7、
　　MRSA耐藥性均顯著高于MSSA的抗生素有苯唑西林、克林霉素、紅霉素、頭孢西丁、鏈霉素500和紅霉素/克林霉素。農(nóng)村樣本分離的MRSA對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥性顯著高于城市MRSA，其他抗生素耐藥性未發(fā)現(xiàn)顯著性差異。農(nóng)村樣本分離的MSSA對(duì)的耐藥性顯著高于城市MSSA的抗生素有苯唑西林、四環(huán)素、氯霉素、環(huán)丙沙星、復(fù)方新諾明和頭孢西丁，耐藥性顯著低于城市MSSA的抗生素有鏈霉素500和慶大霉素，其他抗生素耐藥性未發(fā)現(xiàn)顯著性差異。

8、>　　3.金葡菌株中分離率較高的spa型別t437、t002和t899分離率分別為16.33％、14.74％、7.17％，其余尚有t011、t078、t368等50多種型別。城市樣本中MRSA分離株的主要型別是t437，而農(nóng)村MRSA的主要型別是t437和t899。城市MSSA多數(shù)為t002，而農(nóng)村MSSA以t002為主。結(jié)果顯示，spa分型的差異不僅體現(xiàn)在MRSA與MSSA之間，城鄉(xiāng)之間亦呈現(xiàn)顯著性差異。
　　主要的3種spa型

9、別中MDR的比率均高于80％，且均對(duì)青霉素、紅霉素和克林霉素表現(xiàn)較高的耐藥性。spa型別為t899的菌株普遍耐藥性較高，t437次之，t002的菌株耐藥性較低，僅對(duì)慶大霉素和環(huán)丙沙星耐藥性高于t437。
　　4.金葡菌分離株中pvl基因陽(yáng)性率為15.94％，其中城市人群分離株pvl基因攜帶陽(yáng)性率3.88％，農(nóng)村人群分離株pvl攜帶陽(yáng)性率22.97％。城市人群金葡菌分離株pvl基因陽(yáng)性率顯著低于農(nóng)村。MRSA分離株pvl基因攜帶率為

10、66.67％，顯著高于MSSA分離株8.65％的攜帶率。
　　討論：
　　1.MRSA在金葡菌中的檢出率為13.15％。城市和農(nóng)村兩部分人群金葡菌和MRSA攜帶率沒(méi)有顯著性差異;
　　2.當(dāng)使用抗生素治療金葡菌感染疾病時(shí)，青霉素、紅霉素、氯霉素等傳統(tǒng)藥物已不可選，克林霉素、苯唑西林、四環(huán)素和頭孢西丁等藥物也可能對(duì)MRSA失效，環(huán)丙沙星和復(fù)方新諾明普遍效果較好，達(dá)托霉素對(duì)MRSA和MSSA生長(zhǎng)表現(xiàn)完全抑制，萬(wàn)古霉素仍是M

11、RSA治療的最后一道防線。城鄉(xiāng)MRSA分離株耐藥性差異不大，農(nóng)村樣本MSSA菌株耐藥性總體高于城市;
　　3.金黃色葡萄球菌在spa基因位點(diǎn)呈現(xiàn)較強(qiáng)的序列重復(fù)性和較高的多態(tài)性。研究發(fā)現(xiàn)，spa分型的差異不僅體現(xiàn)在MRSA與MSSA之間，城鄉(xiāng)之間亦呈現(xiàn)顯著性差異，不同spa型別所表現(xiàn)的耐藥性亦有顯著差異;spa基因型別的差異可能是不同來(lái)源菌株耐藥性差異的原因;
　　4.MRSA的pvl攜帶率顯著高于MSSA，農(nóng)村人群攜帶的金葡

12、菌分離株pvl基因攜帶率更高，可能造成感染后癥狀更重，預(yù)后更加不良。
　　結(jié)論：
　　山東地區(qū)社區(qū)健康成年人金葡菌攜帶率較高，而MRSA攜帶率較為一般，與我國(guó)醫(yī)院MRSA檢出率一致。城鄉(xiāng)人群在金葡菌和MRSA攜帶率方面沒(méi)有差異，而農(nóng)村樣本分離的MSSA表現(xiàn)了較高的耐藥率。菌株普遍表現(xiàn)對(duì)青霉素、紅霉素和克林霉素較高的耐性，對(duì)萬(wàn)古霉素、達(dá)托霉素敏感性較好。
　　spa基因型別以t437、t899和t002為主，前兩者主要存