棗葉片再生途徑的組織學(xué)研究及影響遺傳轉(zhuǎn)化因素的分析.pdf

1、棗(Zizyphus jujuba Mill.)是我國(guó)第一大干果樹(shù)種。棗花蕾小、自然坐果率低、胚敗育率高等因素,傳統(tǒng)雜交育種方法存在周期長(zhǎng)、效率低等問(wèn)題,獲得優(yōu)質(zhì)多抗的棗新品種困難重重。本試驗(yàn)以灰棗葉片為試材,對(duì)外植體、培養(yǎng)基、生長(zhǎng)激素濃度組合、外植體放置方式、蔗糖濃度等影響葉片再生的因素進(jìn)行了研究,并對(duì)灰棗離體再生不定芽途徑進(jìn)行組織學(xué)觀(guān)察；在所建立的再生體系基礎(chǔ)上,對(duì)灰棗葉片的遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行了初步研究。主要試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　

2、1.灰棗葉片再生體系建立
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明,灰棗葉片離體再生不定芽的適宜培養(yǎng)基為WPM+TDZ0.5mg/L+NAA0.2mg/L；最佳葉片來(lái)源為灰棗組培苗中部平展,大而厚葉片；近葉柄處再生率比近葉尖處高；以遠(yuǎn)軸面接觸培養(yǎng)基葉片再生率較高為69.61％；蔗糖濃度為40g/L可降低再生芽的玻璃化程度；葉片暗培養(yǎng)時(shí)間以10d葉片再生率較高為81.6％；0.5mg/LAgNO3和0.1 mg/L的STS均提高了灰棗葉片再生率,再生率

3、分別為82.25％,91.26％。
　　 2.灰棗葉片離體再生途徑的組織學(xué)研究
　　 以灰棗葉片為外植體,對(duì)葉片離體培養(yǎng)再生不定芽過(guò)程進(jìn)行了解剖學(xué)觀(guān)察。將葉片接種于附加0.5mg/L TDZ,0.2mg/LNAA和0.5mg/LAgNO3的WPM分化培養(yǎng)基上,經(jīng)過(guò)10d的暗培養(yǎng),隨后轉(zhuǎn)至14h/10h光照培養(yǎng)條件下繼續(xù)進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。組織學(xué)研究結(jié)果表明,灰棗葉片不定芽主要起源于維管束周?chē)谋”诩?xì)胞,發(fā)生過(guò)程不經(jīng)歷愈傷

4、組織階段。最初是維管束周?chē)谋”诩?xì)胞啟動(dòng)分裂,之后加速分裂形成分生組織細(xì)胞團(tuán),進(jìn)而分裂形成不定芽點(diǎn)。
　　 3.灰棗遺傳轉(zhuǎn)化研究
　　 試驗(yàn)研究了卡那霉素對(duì)葉片再生和不同共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)灰棗葉片再生培養(yǎng)基中添加40mg/L卡那霉素能抑制不定芽的分化,因此在后續(xù)篩選培養(yǎng)中使用卡那霉素濃度為40mg/L；灰棗遺傳轉(zhuǎn)化中,共培養(yǎng)2d轉(zhuǎn)化率最高,為21.1％；對(duì)獲得的灰棗轉(zhuǎn)化植株葉片進(jìn)行組織化學(xué)染色分析