棗不同外植體再生及轉(zhuǎn)化Bt基因的研究.pdf

1、棗(ZizyphusjujubaMill.)為鼠李科棗屬植物，是我國第一大干果樹種和最具代表性的民族果樹之一。棗耐干旱、瘠薄和鹽堿，抗干熱風(fēng)，結(jié)果早，但其也存在病蟲害嚴(yán)重，落花落果嚴(yán)重等缺陷。本實(shí)驗(yàn)以蜂蜜罐棗成熟胚為材料，建立了棗不同外植體再生體系，為棗的遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ);另外，以灰棗葉片和蜂蜜罐為材料，進(jìn)行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)棗樹抗蟲基因遺傳轉(zhuǎn)化的研究。主要結(jié)果如下:
　　(1)蜂蜜罐棗未成熟胚培養(yǎng)流程:蜂蜜罐棗胚培養(yǎng)基為空白MS培

2、養(yǎng)基，7d云右子葉伸展出現(xiàn)真葉，培養(yǎng)25d左右，實(shí)生苗株高可達(dá)1-3cm，40d左右，實(shí)生苗株高可達(dá)12cm左右。
　　(2)蜂蜜罐實(shí)生苗莖段再生:將蜂蜜罐實(shí)生苗的莖段，接種至含有不同濃度6-BA和IAA的MS培養(yǎng)基上，觀察莖段在不同培養(yǎng)基上切口愈傷組織誘導(dǎo)率等。結(jié)果表明，附加1.0mg/L6-BA和0.1mg/LIA的MS培養(yǎng)基莖段切口出愈率最高。
　　(3)蜂蜜罐實(shí)生苗上胚軸再生:①愈傷組織誘導(dǎo)和增殖:將上胚軸接種至MS

3、+6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L+AgNO30.5mg/L培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，40d左右上胚軸切口處出現(xiàn)愈傷組織，將其再接至繼代培養(yǎng)基上MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L+AgNO30.5mg/L進(jìn)行增殖培養(yǎng)②不定芽誘導(dǎo)和增殖:20d左右，在愈傷組織表面出現(xiàn)綠色芽點(diǎn);待不定芽芽長至2cm左右時(shí)，將其轉(zhuǎn)接在培養(yǎng)基上MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L;進(jìn)行增殖培養(yǎng);③不定芽伸長培養(yǎng)及不定根誘導(dǎo):將

4、不定芽切下接種至MS+6-BA1.5mg/L+IAA0.1mg/L+GA32.0mg/L培養(yǎng)基上進(jìn)行伸長培養(yǎng)，當(dāng)不定芽伸長至3cm左右時(shí)，將其接種于生根培養(yǎng)基（1/2MS+IBA1.5mg/L+IAA0.3mg/L）上誘導(dǎo)生根。
　　(4)蜂蜜罐實(shí)生苗根外植體再生:毛狀須根表面10d左右誘發(fā)愈傷，培養(yǎng)基誘導(dǎo)根20d左右產(chǎn)生綠色芽點(diǎn)，45d后長成完整植株。初步認(rèn)為，不定芽再生的培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/

5、L;60d，根再生植株的增殖。
　　(5)灰棗成年莖段再生:灰棗成年態(tài)枝條升汞滅菌10min效果最好，污染率最低，存活率最高為90.26％。莖段約15d左右，首先出現(xiàn)愈傷，28d后，出現(xiàn)不定芽芽點(diǎn)，35d后生長為不定梢，初步認(rèn)定1/2MS+KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L為灰棗成年態(tài)莖段再生的最適培養(yǎng)基。
　　(6)Bt基因轉(zhuǎn)化棗的研究:①蜂蜜罐實(shí)生苗葉片轉(zhuǎn)化Bt基因:農(nóng)桿菌A1C侵染蜂蜜罐棗葉片，OD600=0.6