豬GBP1、GBP2基因的分子特征與功能初步研究.pdf

1、疾病的預防與控制是現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)的關(guān)鍵問題,因而發(fā)掘疾病抵抗候選基因并應(yīng)用于抗病育種的實踐越來越重要。前期通過感染沙門氏菌豬肺臟的轉(zhuǎn)錄組研究我們篩選出許多差異表達基因,其中包括干擾素誘導的鳥苷酸結(jié)合蛋白(interferoninducible guanylate bindins proteins,GBPs)家族的GBP1和GBP2。研究表明,GBPs類似于Mx蛋白(myxovirus)都屬于干擾素誘導的GTP酶大家族,他們對生物體抵抗細胞

2、內(nèi)病原微生物感染起著重要作用。因此,我們以豬的GBP1和GBP2基原因研究對象進行了基因克隆,染色體定位,亞細胞定位,與免疫性狀的關(guān)聯(lián)分析和感染實驗等相關(guān)研究。主要的研究結(jié)果如下:
　　 1.克隆了豬GBP1和GBP2基因3003bp和2237bp長的cDNA序列并分析了基因組結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)兩個基因都包含11個外顯子。推導的氨基酸序列分析顯示這兩個基因都包含經(jīng)典的GTP結(jié)合基序,并且C末端具有蛋白質(zhì)異戊二烯化修飾的CAAX基序。

3、r>　　 2.利用體細胞和輻射雜種板將GBP1和GBP2分別定位于SSC4q21-q23和SSC4q24,都和SWR153標記緊密連鎖。
　　 3.RT-PCR方法分析組織表達發(fā)現(xiàn)GBP1和GBP2基因都在成年通城豬的脾臟具有很高的表達水平,轉(zhuǎn)染融合表達質(zhì)粒的亞細胞定位結(jié)果顯示GBP1和GBP2均在細胞質(zhì)中表達。GBP1和GBP2基因在RNA水平上有著十分相似的表達模式。Poly(I:C)刺激PK15細胞的實驗顯示兩個基因在刺

4、激6小時后開始上調(diào),6小時到12小時表達量迅速增加,在約24小時后達到表達的頂峰,隨后在24到48小時開始回落。克隆了兩個基因5’調(diào)控區(qū)的序列,轉(zhuǎn)錄因子預測結(jié)果表明ISRE和GAS順式作用元件可能在調(diào)控GBP1和GBP2基因表達中起關(guān)鍵作用。
　　 4.在兩個基因中分別發(fā)現(xiàn)T4個和3個SNP位點,并對其中兩個改變氨基酸的SNP位點進行了免疫性狀的關(guān)聯(lián)分析,中外豬種的基因型頻率分析。關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示GBP1的Eco81I多態(tài)位點和