EGF聯(lián)合NS398對(duì)貓角膜內(nèi)皮冷凍損傷的修復(fù)作用.pdf

1、角膜內(nèi)皮損傷愈合不良造成角膜混濁和水腫,影響了人的視力,損害了人的身心健康。而人的角膜內(nèi)皮難以修復(fù),與其它動(dòng)物(如兔和牛)的內(nèi)皮細(xì)胞能通過(guò)有絲分裂促進(jìn)愈合不同,人、貓和靈長(zhǎng)類的細(xì)胞有絲分裂能力受房水中TGF-β2抑制,細(xì)胞只能通過(guò)有限的移行和擴(kuò)大來(lái)填補(bǔ)內(nèi)皮層受損區(qū),嚴(yán)重的損傷常導(dǎo)致愈合不良。對(duì)此,我們將促內(nèi)皮生長(zhǎng)的因子EGF和抗TGF-β2的藥物NS398按一定比例分別在貓的體外和體內(nèi)聯(lián)合使用,了解它們促內(nèi)皮層愈合的效率。并在這個(gè)過(guò)程中

2、,檢測(cè)TGF-β2的信號(hào)蛋白Smad2、內(nèi)皮肌纖維母細(xì)胞的標(biāo)志蛋白α-SMA和新生內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志蛋白PCNA含量變化。以了解它們促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的再生和減輕內(nèi)皮層混濁的機(jī)理。
　　 體外培養(yǎng)貓的角膜內(nèi)皮細(xì)胞,先用MTT法檢測(cè)不同濃度的TGF-β2對(duì)角膜內(nèi)皮增殖的抑制效果。再將最佳濃度的TGF-β2添加到培養(yǎng)基中,模擬貓?bào)w內(nèi)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制環(huán)境,檢測(cè)不同濃度的EGF和NS398對(duì)受抑制細(xì)胞的促增殖效果。最后檢測(cè)EGF和NS398

3、合用促細(xì)胞增殖的最佳濃度以及作用時(shí)間。
　　 體內(nèi)建立貓的角膜內(nèi)皮冷凍損傷模型。以左眼為對(duì)照組,右眼為EGF和NS398聯(lián)合給藥組,用免疫組化的方法比較兩眼中Smad2、α-SMA和PCNA的含量變化,用臺(tái)盼藍(lán)-茜素紅染色檢測(cè)并比較二者內(nèi)皮層的愈合狀況。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明:TGF-β2劑量依賴性的抑制貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖,最佳抑制濃度為10ng/mL。無(wú)論內(nèi)皮細(xì)胞是否受TGF-β2抑制,EGF的促增殖最佳濃度均為10ng

4、/mL,在10ng/mL TGF-β2、10ng/mLEGF的細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中,NS398促增殖最佳濃度為5umol/mL,而且其促增殖效率在第三天達(dá)到頂點(diǎn)。將10ng/mL,EGF和5umol/mL NS398在貓的角膜內(nèi)皮冷凍損傷模型的藥物組中聯(lián)合使用,能有效提高內(nèi)皮層的愈合效率。修復(fù)過(guò)程中,相同時(shí)間內(nèi)藥物組中未被修復(fù)的內(nèi)皮層面積遠(yuǎn)低于對(duì)照組,到第7天,藥物組中的內(nèi)皮細(xì)胞基本覆蓋了整個(gè)內(nèi)皮層。各項(xiàng)愈合指標(biāo)均優(yōu)于對(duì)照組,顯示了良好的促愈

5、合趨勢(shì)。對(duì)照組中的Smad2和α-SMA含量遠(yuǎn)高于藥物組,而PCNA的含量比藥物組低。
　　 通過(guò)試驗(yàn)可以得出:10ng/mLTGF-β2體外抑制貓內(nèi)皮細(xì)胞增殖后,10ng/mL EGF和5umol/mL,NS398聯(lián)合給藥能顯著提高內(nèi)皮細(xì)胞的增殖效率。最佳的作用周期為3天。在體內(nèi),藥物組NS398能通過(guò)降低Smad2的含量,阻斷TGF-β2的Smad信號(hào)途徑,消除了TGF-β2對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖周期的抑制和促肌纖維母細(xì)胞轉(zhuǎn)化的作用