不同品系雞Tmem9A-9B基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、TMEM9(Transmembrane protein9domain family)作為一個(gè)跨膜蛋白家族，在從線蟲到人類等不同物種間高度保守。目前，該家族已發(fā)現(xiàn)TMEM9A和TMEM9B兩個(gè)成員。人TMEM9A蛋白定位于溶酶體和次級(jí)內(nèi)體上，TMEM9B是一種重要糖蛋白，定位于溶酶體膜和初級(jí)內(nèi)體膜上。目前，關(guān)于這兩個(gè)基因的表達(dá)和功能特性研究報(bào)道較少。本研究以雞為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，克隆Tmem9A和Tmem9B基因并對(duì)其表達(dá)與功能特性進(jìn)行初探，主要

2、研究方法和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　首先，本研究克隆了海蘭褐雞、AA+肉雞和三黃雞Tmem9A基因與AA+肉雞和三黃雞Tmem9B基因的全長(zhǎng)編碼序列并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明:海蘭褐雞、AA+肉雞和三黃雞Tmem9A基因編碼序列全長(zhǎng)均為576bp，Tmem9B基因全長(zhǎng)均為570bp，不同品系雞的這兩個(gè)基因編碼序列均存在SNP位點(diǎn)，但Tmem9A和Tmem9B基因均高度保守。通過(guò)對(duì)Tmem9A和Tmem9B的核苷酸序列和氨基酸序列比較

3、分析，二者同源性分別為60％與50％左右，表明Tmem9A和Tmem9B之間的同源性不高。蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析發(fā)現(xiàn)TMEM9A的50～190AA和TMEM9B的45～188AA位置均存在Tmemb_9超家族結(jié)構(gòu)域;TMEM9B的N-端4～23AA存在一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，而TMEM9A無(wú)此跨膜區(qū);TMEM9A和TMEM9B蛋白均存在N端信號(hào)肽、cys富集區(qū)和N-糖基化位點(diǎn);3D結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)表明TMEM9A和TMEM9B蛋白均存在螺旋區(qū)。
　　其

4、次，對(duì)Tmem9A和Tmem9B基因進(jìn)行了組織表達(dá)譜分析，結(jié)果顯示Tmem9A和Tmem9B基因在14日齡AA+雞、三黃雞和海蘭褐雞雛雞的多種組織中均有表達(dá)，但是不同品系雛雞間略有差異。有趣的是，Tmem9A和Tmem9B基因在三個(gè)品系雛雞的腦組織中均具有高轉(zhuǎn)錄活性。在不同發(fā)育階段海蘭褐雞的組織表達(dá)譜分析顯示，Tmem9A和Tmem9B表達(dá)活性均在24月齡成雞腺胃中顯著上調(diào)。
　　最后，對(duì)炎癥模型和疫苗免疫模型雛雞Tmem9A和T

5、mem9B基因進(jìn)行組織表達(dá)譜分析，結(jié)果顯示在LPS制備的炎癥模型雛雞中，Tmem9A基因的表達(dá)活性在海蘭褐雞法氏囊中上調(diào)而在肝臟、脾和胸腺中下調(diào);在AA+肉雞的胸腺中下調(diào)，在肝臟、脾和法氏囊中上調(diào)。Tmem9B基因在兩個(gè)品系雞4種組織（肝臟、脾、法氏囊和胸腺）中的轉(zhuǎn)錄活性均上調(diào)。在疫苗免疫的海蘭褐雞中，Tmem9A基因的表達(dá)活性在新城疫疫苗免疫模型4個(gè)免疫相關(guān)組織（肝臟、脾、法氏囊和胸腺）中均上調(diào);在禽流感疫苗免疫模型的肝臟和脾中上調(diào)，