通過重編程方法將大鼠肝細胞誘導為多能干細胞的研究.pdf

1、誘導性多能干細胞(iPSCs)是利用特異的誘導因子組合，如重編程因子組合或結合某些小分子化合物等將成熟的體細胞去分化為類似于胚胎干細胞的一種多潛能細胞。這些細胞具有胚胎干細胞的特征，并能分化為三種胚層細胞。有關iPSCs的研究極大地促進了細胞的分化調控、再生醫(yī)學、細胞發(fā)育等基礎研究，并有極高的臨床應用前景。
　　本文利用慢病毒介導的基因轉染技術將重編程因子組合Sox2、Oct4、c-Myc和Klf4導入原代培養(yǎng)的大鼠肝細胞，對其進

2、行誘導去分化。肝細胞在含四種重編程因子的重組慢病毒感染7天后，其形態(tài)開始發(fā)生改變。將其轉移到飼養(yǎng)層細胞(MEFs)上培養(yǎng)11天后，部分細胞聚集在一起，呈致密克隆狀生長，邊界清晰且致密整齊，形成與大鼠胚胎干細胞相似的克隆。這些克隆細胞較小、增殖迅速，且在高倍鏡下觀察到細胞核較大，核質比率較高。從克隆形態(tài)初步判斷為大鼠iPSCs克隆，堿性磷酸酶染色結果顯示，這些細胞克隆表達了高水平的堿性磷酸酶。
　　采用逆轉錄PCR(RT-PCR)分

3、別分析誘導的細胞克隆、大鼠原代培養(yǎng)肝細胞和大鼠4.5天胚胎中的基因表達狀況。結果顯示外源重編程因子(Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4)僅在誘導的細胞克隆中表達；大鼠胚胎干細胞標志基因Sox2、Oct4、Nanog、Fgf4、Lin28和Ncam在誘導的細胞克隆和4.5天大鼠胚胎中均有表達。進一步的免疫熒光染色檢測結果顯示，上述誘導的細胞克隆表達了大鼠胚胎干細胞的標志蛋白SSEA-1和Nanog。綜上結果表明，本實驗成功地將大鼠原