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1、類過(guò)敏反應(yīng)是中藥注射劑最常見(jiàn)的臨床不良反應(yīng)之一。開(kāi)展中藥注射劑類過(guò)敏反應(yīng)基礎(chǔ)研究,準(zhǔn)確篩查出致敏原,是中藥安全性研究領(lǐng)域的重要命題。本論文旨在通過(guò)體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)中藥注射劑類過(guò)敏反應(yīng)致敏原進(jìn)行篩查和驗(yàn)證,進(jìn)而開(kāi)展代謝組學(xué)研究,檢測(cè)致敏原引起類過(guò)敏反應(yīng)后的內(nèi)源性代謝物譜變化,探討其致敏機(jī)制,為深入開(kāi)展中藥注射劑再評(píng)價(jià)研究提供科學(xué)數(shù)據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容如下:
(1)通過(guò)RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒模型,以β-氨基己糖苷酶為檢測(cè)指標(biāo),篩查八
2、種中藥注射劑致肥大細(xì)胞脫顆粒作用,發(fā)現(xiàn)其中一種注射劑能明顯致RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒。其致敏成分篩查結(jié)果顯示,人參皂苷Rd可明顯引起細(xì)胞釋放β-氨基己糖苷酶和IL-4,且具有劑量依賴的趨勢(shì)。進(jìn)一步開(kāi)展的小鼠皮膚血管通透性實(shí)驗(yàn)中,Rd能引起皮膚血管通透性增加且具有劑量依賴趨勢(shì),驗(yàn)證了體外篩查結(jié)果。對(duì)Rd致肥大細(xì)胞脫顆粒機(jī)制初步研究發(fā)現(xiàn),Rd可影響MAPK通路中ERK1/2、JNK及p38的磷酸化水平,說(shuō)明MAPK信號(hào)通路在Rd直接激活肥大
3、細(xì)胞的過(guò)程中起到重要作用。
(2)小鼠急性類過(guò)敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Rd可顯著引起小鼠血漿組胺水平的升高。通過(guò)超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC-QTOF/MS)代謝組學(xué)方法,分析了Rd致敏小鼠與對(duì)照組小鼠在10 min、30 min和2h三個(gè)作用時(shí)間點(diǎn)的血漿樣本中內(nèi)源性代謝物變化,結(jié)合偏最小二乘判別分析(PLS-DA)及正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)模式識(shí)別方法,結(jié)果顯示在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上Rd致敏組樣本均能與對(duì)照
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