鋅離子對早期腹透相關(guān)性腹膜炎和腹膜巨噬細胞極化的影響.pdf

1、背景：終末期腎臟疾病(End-stage renal disease，ESRD)是嚴重危害人類健康的疾病，患者在進行腎臟替代治療時，持續(xù)性不臥床腹膜透析(Continuous ambulatoryperitoneal dialysis，CAPD)是主要的方法之一，然而，在長期的腹膜透析過程中，腹膜暴露于生物不相容性的腹膜透析液(Peritoneal dialysis solution，PDS)中，腹膜易受損傷，發(fā)生腹膜炎，并逐漸進展為腹

2、膜纖維化，導致腹膜透析效能的下降，最終出現(xiàn)超濾衰竭(Ultrafiltration failure，UFF)，這成為長期腹膜透析患者退出治療的主要原因。已有相關(guān)文獻證實，經(jīng)典活化型巨噬細胞(M1)參與炎癥的反應(yīng)以及病菌的清除，替代性活化的巨噬細胞(M2)參與組織重塑和纖維化的發(fā)生但M1型巨噬細胞在腹膜透析(PD)相關(guān)性腹膜纖維化中的效果尚未闡明。鋅離子作為一種機體不可缺少的微量元素，在代謝的穩(wěn)態(tài)平衡中起到至關(guān)重要的作用，已有證據(jù)表明，鋅

3、離子的缺乏可引起肺組織，肝組織的纖維化改變。而近期的研究也發(fā)現(xiàn)透析患者有著不同程度的鋅缺乏。據(jù)此，我們設(shè)想不同濃度的鋅離子可能影響巨噬細胞的極化而調(diào)控腹透相關(guān)性腹膜纖維化的進程。
　　目的：觀察4.25％含糖腹透液及不同濃度的鋅離子誘導的大鼠腹膜纖維化模型中纖維化相關(guān)標志物CollagenⅠ、α-SMA表達的變化;巨噬細胞極化標志物CCR7、CD206及F4/80的表達分布;巨噬細胞極化標志物IL-1β、CCL22表達的變化。

4、r>　　方法：清潔級SD雄性大鼠24只隨機分為4組，實驗周期為7天:生理鹽水組(n=6):每日按100ml/kg向腹腔內(nèi)注射0.9％生理鹽水;高糖組(n=6):每日按100ml/kg向腹腔內(nèi)注射4.25％的含糖透析液;硫酸鋅低濃度組(n=6):按100ml/kg體重給予每日腹腔注射4.25％含糖透析液加入硫酸鋅3.9mg/kg;硫酸鋅高濃度組(n=6):按100ml/kg體重給予每日腹腔注射4.25％含糖透析液加入硫酸鋅15.5mg/k

5、g。7天后檢殺大鼠并取材，留取壁層腹膜組織行HE染色及免疫熒光等檢測，臟層腹膜組織行Westemblot及ELISA等檢測。
　　結(jié)果：壁層腹膜HE染色光鏡下觀察:生理鹽水組:腹膜較薄，覆蓋一層線性扁平間皮細胞，大網(wǎng)膜幾乎無炎癥細胞浸潤，間皮下基質(zhì)較少，僅有少量纖維組織沉積;高糖持續(xù)刺激7天后，腹膜間皮細胞多保持在扁平狀，細胞下基質(zhì)增厚，少量炎性細胞浸潤;硫酸鋅低濃度組第7天腹膜炎增強，腹膜間皮細胞呈扁平狀，部分脫落，腹膜表面可見

6、炎性細胞浸潤;硫酸鋅高濃度組第7天腹膜炎癥明顯增強，腹膜間皮細胞呈扁平狀，間皮下基質(zhì)增厚，間質(zhì)炎癥細胞增多，腹膜表面有大量單核巨噬細胞浸潤。western blot結(jié)果顯示在腹膜纖維化早期，生理鹽水組、高糖組、硫酸鋅低濃度組、硫酸鋅高濃度組，臟層腹膜組織中均有α-SMA、collagen I的表達;高糖對照組、硫酸鋅低濃度組、硫酸鋅高濃度組表達逐漸升高，說明隨著鋅離子濃度的升高，纖維化程度逐漸升高。高糖組與生理鹽水組比較，硫酸鋅低濃度組

7、、硫酸鋅高濃度組分別與生理鹽水組比較，差異有意義，p＜0.05;免疫熒光測試的實驗結(jié)果為:在生理鹽水對照組中，巨噬細胞(F4/80)分布較少，M1型巨噬細胞標記物(CCR7)幾乎呈陰性，表達較少，M2型巨噬細胞(CD206)同樣表達較少，呈弱陽性;在高糖對照組中，巨噬細胞(F4/80)表達稍增強，M1型巨噬細胞(CCR7)與M2型巨噬細胞(CD206)表達也增強;在硫酸鋅低濃度組中，巨噬細胞(F4/80)表達增強，呈散點狀分布，介于高糖

8、組與硫酸鋅高濃度組之間，M1型巨噬細胞標記物(CCR7)與M2型巨噬細胞標記物(CD206)表達分布也增強，呈陽性;在硫酸鋅高濃度組中，M1型巨噬細胞(CCR7)表達較硫酸鋅低濃度組表達升高，M2型巨噬細胞(CD206)表達明顯增強，與巨噬細胞分布相吻合呈耀眼的強陽性;ELISA檢測生理鹽水組、高糖組、硫酸鋅低濃度組、硫酸鋅高濃度組的大鼠臟層腹膜中均有巨噬細胞M1型、M2型極化分泌標記物蛋白的表達，結(jié)果顯示，生理鹽水組、高糖組、硫酸鋅低

9、濃度組、硫酸鋅高濃度組中IL-1β、CCL22的表達程度逐漸升高，說明在腹膜纖維化早期巨噬細胞M1型極化的程度逐漸升高，M2型巨噬細胞極化程度也逐漸升高，但M1型巨噬細胞極化占主要地位。
　　結(jié)論：⑴高糖刺激下巨噬細胞M1、M2型極化程度升高，在加入鋅離子后，隨著鋅離子濃度升高，巨噬細胞M1型、M2型極化也升高，但以M1型極化占主導；⑵高濃度的鋅離子會刺激巨噬細胞極化程度顯著升高，而低濃度的鋅離子較高濃度鋅離子會減弱巨噬細胞的極化