蜂王漿蛋白質、多肽生物活性及儲藏過程中品質變化研究.pdf

1、蜂王漿作為一種珍貴的保健食品已經有干百年的歷史了,其對人體的各種生物活性與含有的功能性成分是近年來的研究熱點。本研究檢測了蜂王漿的物理、化學特性、儲藏穩(wěn)定性和抗氧化活性,初步研究了它對脂肪酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性,優(yōu)化了蜂王漿蛋白質酶解法制備活性多肽的條件并對活性組分進行純化以提高活性。
　　 本論文采用杭州保靈養(yǎng)泰禾提供的蜂王漿,在4℃、25℃、37℃下各保存30天,發(fā)現(xiàn)樣品的水溶性蛋白質含量、氨基酸含量、多肽含量、水分含

2、量等逐漸下降,而水解度、脂肪氧化程度、酸度逐漸提高,酸敗程度逐漸增加,顏色變暗;通過對脂類物質的GC-MC分析,檢測出24種脂類成分;通過SDS-PAGE電泳分析,發(fā)現(xiàn)儲藏溫度越高,蜂王漿水溶性蛋白質降解就越明顯。這些理化指標隨溫度和時間的變化較敏感,可作為品質評價的參考,也說明了蜂王漿儲藏穩(wěn)定性較差,可能是引起活性變化的原因。
　　 通過對蜂王漿生物活性的分析,發(fā)現(xiàn)蜂王漿蛋白質提取液有較高的抗氧化活性,并首次發(fā)現(xiàn)蜂王漿具有較高

3、的脂肪酶抑制活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性。蜂王漿蛋白質對DPPH自由基的清除率最高能達到60％以上;對鄰苯三酚自氧化的抑制率最高能達到91.89％;對脂質體過氧化的抑制率最高能達到60.10％;其抗氧化活性隨著儲藏時間逐漸下降,儲藏溫度越高,活性下降越快。蜂王漿蛋白質對脂肪酶的抑制率最高能達到76.59％,對脂肪酶的抑制常數(shù)ki為5.53×10-2mg/mL,抑制類型為競爭性抑制,抑制活性隨著儲藏溫度和儲藏時間的增加而下降:對α-葡萄糖

4、苷酶的抑制活性最高達到66.23％,抑制常數(shù)ki為11.74 mg/mL,抑制類型為混合競爭性抑制。
　　 本實驗用單因素試驗和Box-Bohnken中心組合設計試驗,優(yōu)化了蜂王漿蛋白質酶解制備活性多肽的工藝參數(shù),選擇胃蛋白酶為作用酶,蛋白質提取料液比1:50,酶解時間5.7 h,初始pH2.3,酶用量21mg/mL,酶解溫度35℃,在此條件下,多肽濃度達到1.65 mg/mL,且抗氧化活性、對脂肪酶的抑制活性和對α-葡萄糖苷酶

5、的抑制活性都明顯提高,說明酶解處理提高了蜂王漿的利用價值。
　　 蜂王漿蛋白質在三種酶解方式作用下的產物:PPs(胃蛋白酶酶解)、TPs(胰蛋白酶酶解)、PTPs(胃蛋白酶和胰蛋白酶復合酶解)。其中對DPPH自由基的清除活性最強的是PTPs,樣品的水解度最高,氨基酸產率也最高;而對于超氧陰離子的清除活性及對脂肪酶、α-葡萄糖苷酶的抑制活性來說最強的是PPs,樣品的多肽含量最高;從各分子量范圍的酶解產物來看,PPs中小于650 D