血管緊張素Ⅱ2型受體活化對PC12細(xì)胞缺氧-再供氧損傷的作用及機(jī)制.pdf

1、缺血性腦血管病是一種常見的腦血管病，致殘和致死率高，且在治療過程中容易造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺氧/再灌注損傷。研究發(fā)現(xiàn)，血管緊張素Ⅱ2型受體（AT2R）能影響正常的神經(jīng)可塑性和學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能；可舒張血管，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長發(fā)育，促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化，參與組織結(jié)構(gòu)的修復(fù)和重塑；可通過促進(jìn)側(cè)枝循環(huán)開放，改善腦血液循環(huán)，對缺血性腦損傷起保護(hù)作用。目前，AT2R活化在神經(jīng)細(xì)胞缺血/再灌注損傷中的具體作用及機(jī)制尚不清楚。本研究旨在探討AT2R活化對缺氧/再

2、供氧損傷PC12細(xì)胞生長的影響及初步機(jī)制。
　　PC12細(xì)胞是大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞株，具有神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的一般特征，被廣泛應(yīng)用于神經(jīng)生理學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域的研究。本研究采用含10％胎牛血清的高糖DMEM完全培養(yǎng)基，于37℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)PC12細(xì)胞16～24h，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)80-90%時，棄去培養(yǎng)液，無菌 PBS洗三次，用含化學(xué)性缺氧劑連二亞硫酸鈉（Na2S2O4）的無糖無血清培養(yǎng)基孵育1小時，再更換新鮮10%胎牛血

3、清高糖DMEM培養(yǎng)基，復(fù)制缺血/再灌注損傷的神經(jīng)細(xì)胞模型。缺氧/再供氧損傷PC12細(xì)胞分別予AT2R拮抗劑（PD123319）、AT2R激動劑（CGP42112）及P38MAPK抑制劑（SB203580）進(jìn)行相應(yīng)處理。經(jīng)臺盼藍(lán)染色后顯微鏡下觀察細(xì)胞活力變化，采用MTT法觀察細(xì)胞存活率的變化，以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測Bax、Bcl-2 mRNA表達(dá)的變化，以Western blot免疫印跡分析磷酸化P38MAPK、Bax、Bcl-2蛋白

4、表達(dá)的變化。
　　結(jié)果顯示：
　　1、顯微鏡下可見 PC12細(xì)胞經(jīng)Na2S2O4處理后，細(xì)胞出現(xiàn)腫脹，突起收縮，甚至斷裂，死細(xì)胞被染成藍(lán)色。MTT法檢測的細(xì)胞存活率約為55-60%，提示復(fù)制PC12細(xì)胞缺氧/再供氧損傷模型成功。
　　2、缺氧/再供氧損傷 PC12細(xì)胞經(jīng)PD123319處理后，與模型組相比，p-P38MAPK蛋白水平表達(dá)上調(diào)、而細(xì)胞存活率則顯著下降、Bax mRNA水平明顯上調(diào)、Bcl-2 mRNA的表

5、達(dá)則明顯下調(diào)。
　　3、缺氧/再供氧損傷 PC12細(xì)胞經(jīng)CGP42112處理后，與模型組相比，p-P38MAPK蛋白水平表達(dá)下調(diào)、細(xì)胞存活率顯著增高、Bax mRNA水平明顯下調(diào)、Bcl-2 mRNA表達(dá)明顯上調(diào)。
　　4、缺氧/再供氧損傷 PC12細(xì)胞經(jīng) SB203580處理后，與模型組相比，p-P38MAPK蛋白水平表達(dá)下調(diào)、細(xì)胞存活率顯著增高、Bax mRNA及蛋白表達(dá)水平均明顯下調(diào)、Bcl-2 mRNA及蛋白表達(dá)均明