LIPUS對(duì)兔KOA血清TIMP-2和關(guān)節(jié)軟骨MMP-13表達(dá)的影響及臨床療效評(píng)價(jià).pdf

1、我國(guó)已于本世紀(jì)初進(jìn)入老齡化社會(huì)，現(xiàn)有年齡60歲以上的老年人近1.60億，是目前世界上老年人口最多的國(guó)家。骨性關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)逐漸成為最常見(jiàn)的關(guān)節(jié)慢性疾病，其中膝關(guān)節(jié)受累在臨床上最為多見(jiàn)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎(Knee Osteoarthritis，KOA)始發(fā)于膝關(guān)節(jié)軟骨退行性變，關(guān)節(jié)軟骨漸進(jìn)性退變，逐漸出現(xiàn)軟骨裂隙、軟骨缺損，最終可致關(guān)節(jié)軟骨全層磨損剝脫;同時(shí)還可累及整個(gè)關(guān)節(jié)，造成滑膜增生、軟骨下骨硬

2、化及囊變、關(guān)節(jié)周?chē)捻g帶及關(guān)節(jié)囊攣縮，關(guān)節(jié)周?chē)∪馕s等，由此產(chǎn)生以膝關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)不穩(wěn)及活動(dòng)功能減退為主要表現(xiàn)的臨床癥狀。
　　研究發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases，MMPs)對(duì)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的生理及病理降解起重要作用。當(dāng)軟骨受損時(shí)，刺激軟骨細(xì)胞分泌過(guò)量的MMPs，尤其是MMPs家族成員中最有效的Ⅱ型膠原降解酶MMP-13大量表達(dá)，導(dǎo)

3、致構(gòu)成軟骨ECM的主要成分Ⅱ型膠原的降解增加，破壞了軟骨ECM的膠原纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，并造成軟骨ECM另一種成分蛋白多糖（Proteoglycan，PG）的流失，引起軟骨結(jié)構(gòu)破壞和軟骨細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病。
　　超聲波在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用可以追溯至1942年，奧地利醫(yī)生Dussik首次將其用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。隨著對(duì)超聲波作用機(jī)理的研究深入以及相關(guān)應(yīng)用技術(shù)的提高，目前超聲波在臨床上的已經(jīng)得到非常廣泛的應(yīng)用。低強(qiáng)度脈沖超聲波(Lowinte

4、nsity pulsed ultrasound，LIPUS)的頻率一般為1～3MHz，強(qiáng)度小于100mW/cm2，通過(guò)空化效應(yīng)、機(jī)械效應(yīng)以及熱效應(yīng)，改變細(xì)胞周?chē)后w流向，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝產(chǎn)物的排出，從而糾正細(xì)胞缺氧缺血狀態(tài)，增加組織營(yíng)養(yǎng)狀況，提高細(xì)胞再生能力。OA動(dòng)物模型研究表明，低強(qiáng)度脈沖超聲治療可以明顯減輕實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的軟骨損傷程度，骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物進(jìn)行LIPUS治療后，軟骨中的MMP-13表達(dá)量下降，Ⅱ型膠原的降解速度也出現(xiàn)下降。

5、研究證明，LIPUS可以促進(jìn)軟骨細(xì)胞合成蛋白多糖和Ⅱ型膠原，有利于關(guān)節(jié)軟骨的修復(fù)。
　　近年來(lái)，低強(qiáng)度脈沖超聲治療因其安全、無(wú)創(chuàng)、方便、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)，逐漸被臨床醫(yī)生廣泛接受，在膝骨性關(guān)節(jié)炎的臨床治療方面取得了令人滿(mǎn)意的療效。本文將通過(guò)構(gòu)建兔膝骨性關(guān)節(jié)炎模型，研究LIPUS對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎血清中組織金屬蛋白酶抑制因子2(Metalloproteinase inhibitor-2，TIMP-2)和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-13(MMP

6、-13)表達(dá)的影響，探討LIPUS對(duì)膝骨性關(guān)節(jié)炎的治療機(jī)制;并在臨床中應(yīng)用低強(qiáng)度脈沖超聲波治療儀對(duì)輕、中度膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎患者進(jìn)行對(duì)照治療，進(jìn)一步探討LIPUS在治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎中的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　第一部分 低強(qiáng)度脈沖超聲波對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎血清TIMP-2和關(guān)節(jié)軟骨MMP-13表達(dá)的影響
　　目的：研究低強(qiáng)度脈沖超聲波(LIPUS)對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎(OA)血清中組織金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中基質(zhì)金屬

7、蛋白酶-13（MMP-13）表達(dá)的影響。
　　方法：SPF級(jí)新西蘭大白兔40只，體重1±0.5 kg，隨機(jī)挑選10只作為對(duì)照組，其余采用髕韌帶內(nèi)側(cè)缺損法構(gòu)建兔膝骨關(guān)節(jié)炎(OA)模型。建模后4周，各組動(dòng)物耳動(dòng)脈取血，ELISA檢測(cè)血清TIMP-2的表達(dá)水平。分離提取各組動(dòng)物軟骨細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，標(biāo)記為對(duì)照組(Ctrl); OA模型組(OA); OA+LIPUS處理組(OA+L)。Ctrl、OA組細(xì)胞不作處理，OA+L組細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程

8、中接受LIPUS處理（1MHz，40mW/cm2，1次/天）。7天后收集細(xì)胞，分別提取RNA及總蛋白，Real-time PCR及免疫印跡雜交分別在mRNA和蛋白水平分析軟骨細(xì)胞中MMP-13的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.采用髕韌帶內(nèi)側(cè)缺損法構(gòu)建兔OA模型的成功率為83％。
　　2.ELISA的結(jié)果表明，OA動(dòng)物血清中的TIMP-2含量平均比對(duì)照組低22.3％。
　　3.OA模型組，相對(duì)于正常對(duì)照組，TIMP-2表達(dá)水平

9、明顯下調(diào)，而MMP-13的表達(dá)量則明顯上調(diào)。
　　4.經(jīng)過(guò)LIPUS刺激后，TIMP-2及MMP-13的表達(dá)量趨向于正常對(duì)照組(P＜0.05)
　　結(jié)論：1.髕韌帶內(nèi)側(cè)缺損法構(gòu)建兔OA模型是一種成熟的方法，其建模成功率較高，軟骨生化指標(biāo)與人類(lèi)OA也較為一致。
　　2.OA模型組血清TIMP-2的表達(dá)量顯著下調(diào)。
　　3.在原代細(xì)胞中，相對(duì)與正常對(duì)照，OA組TIMP-2下調(diào)，MMP-13上調(diào)，
　　而經(jīng)過(guò)LI

10、PUS刺激后，TIMP-2和MMP-13的水平趨向于正常對(duì)照組。
　　第二部分 低強(qiáng)度脈沖超聲波在治療膝骨關(guān)節(jié)炎中的臨床療效評(píng)價(jià)
　　目的：應(yīng)用低強(qiáng)度脈沖超聲波(LIPUS)治療儀治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎(KOA)患者，探討LIPUS在治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎中的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：選取2014年7月至2015年12月在聊城市第三人民醫(yī)院骨科門(mén)診及病房就診，符合膝關(guān)節(jié)X線(xiàn)片分期標(biāo)準(zhǔn)Ⅰ～Ⅲ期的膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎患者120例，按照隨

11、機(jī)法則分為L(zhǎng)IPUS治療組60例，對(duì)照組（無(wú)LIPUS治療）60例。分別接受為期6周的治療。記錄治療前后兩組患者的VAS評(píng)分、HSS評(píng)分和SF-36生存質(zhì)量評(píng)分。按照受試者的X線(xiàn)片分期，對(duì)VAS評(píng)分、HSS評(píng)分及SF-36生存質(zhì)量各維度的評(píng)分記錄結(jié)果進(jìn)行各類(lèi)整理、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：1.治療組的整體VAS評(píng)分、HSS評(píng)分及SF-36評(píng)分治療后優(yōu)于對(duì)照組，前后評(píng)分對(duì)比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;對(duì)照組的治療前后評(píng)分差別不顯著。
　　2

12、.按照不同膝關(guān)節(jié)X線(xiàn)分期，不同疼痛程度，以及不同膝關(guān)節(jié)功能等級(jí)分別比較，LIPUS治療組患者的關(guān)節(jié)疼痛VAS評(píng)分均有明顯降低(P＜0.05)。同類(lèi)對(duì)照組的差異則不顯著(P＞0.05)。
　　3.Ⅰ～Ⅱ期、輕中度疼痛、膝關(guān)節(jié)功能評(píng)級(jí)為優(yōu)和良的患者LIPUS治療后的HSS評(píng)分較治療前明顯提高(P＜0.05);但對(duì)于Ⅲ期，重度疼痛和膝關(guān)節(jié)功能評(píng)級(jí)為中的患者治療前后的HSS評(píng)分變化不明顯(P＞0.05)。
　　4.治療前后的SF-3

13、6量表總分及其8個(gè)維度評(píng)分比較顯示，LPUS治療對(duì)于緩解身體疼痛(BP)效果最為明顯，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者治療后均有顯著改善;Ⅰ、Ⅱ期患者LIPUS治療后，在大部分維度內(nèi)均有明顯效果，但在RP、RE這兩個(gè)維度內(nèi)效果不明顯;Ⅲ期患者中，除BP維度外，其它維度均無(wú)明顯改善。
　　結(jié)論：1.LIPUS治療對(duì)減輕膝骨性關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)疼痛具有明顯療效;
　　2.LIPUS治療對(duì)于Ⅰ～Ⅱ期、輕中度疼痛和膝關(guān)節(jié)功能較好的膝骨關(guān)節(jié)炎患者具有良