布魯菌內(nèi)蒙古分離株部分外膜蛋白基因的克隆與序列分析.pdf

1、本研究根據(jù)GenBank中已發(fā)表的布魯菌株基因序列設(shè)計(jì)特異性引物。應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)，擴(kuò)增出6個(gè)內(nèi)蒙古分離株(NH-B1、NH-B2、NH-B3、NH-R1、NH-R2、NH-R3)的OMP19、OMP28、OMP25、OMP31基因，將純化的目的DNA與PMD19-T載體連接，轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)細(xì)胞，提取質(zhì)粒，用PCR法鑒定，將鑒定為含有陽(yáng)性質(zhì)粒的菌液測(cè)定基因序列。測(cè)序結(jié)果表明：測(cè)定的OMP19基因節(jié)段長(zhǎng)618bp，均包

2、含完整的開(kāi)放性閱讀框(Open Reading Frame，ORF)，位于43～576bp；OMP28基因節(jié)段長(zhǎng)953 bp，包含完整的開(kāi)放性閱讀框(ORF)，位于151-903 bp；測(cè)定的OMP25基因節(jié)段長(zhǎng)865bl,，均包含完整的開(kāi)放性閱讀框(ORE)，位于1 66-808 bp；OMP31基因節(jié)段長(zhǎng)1167bp，包含完整的開(kāi)放性閱讀框(ORF)，位于137-859bp。
　　 應(yīng)用DNAstar軟件將測(cè)定序列與參考序列

3、的核苷酸的同源性進(jìn)行比較分析，6個(gè)分離株的OMP19基因核苷酸序列之間同源性很高，在99．8％-100％之間；與參考菌株的同源性也很高在99．4％～100％之間。6個(gè)分離株的OMP28基因核苷酸序列之間具有很高的同源性在99.9％～100％之間，其中，NH-B2、NH-B3、NH-R1和NH-R2同源性為100％，NH-B1和NH-R3的同源性也是100％，NH-B2、NH-B3、NH-R1、NH-R2和NH-B1、NH-R3之間同源性

4、為99．9％1與參考菌株的同源性在99．6％～100％之間。6個(gè)分離株的OMP25基因核苷酸序列相互之間同源性很高在99．5％-100％之間；與參考菌株的同源性在99．1％-100％之間；其中，NH-B2、NH-B3、NH-R1、NH-R2與Brucella abortus S19的同源性為100％，NH-B1與Brucellasuis 1330的同源性也為100％。NH-B1、NH-B2和NH-R3分離株的OMP31基因核苷酸序列相互