第一部分：HECTD3預(yù)測及調(diào)控晚期卵巢漿液性腺癌鉑類化療敏感性的機(jī)制研究第二部分：保留盆腔自主神經(jīng)的宮頸癌根治術(shù)應(yīng)用于局部晚期宮頸癌的臨床研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述:
　　第一部分 HECTD3預(yù)測及調(diào)控晚期卵巢漿液性腺癌鉑類化療敏感性的機(jī)制研究
　　目的:以卡鉑為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療在卵巢癌治療中占有重要地位，而鉑類耐藥是導(dǎo)致卵巢癌預(yù)后不良的主要因素，尋找預(yù)測以及逆轉(zhuǎn)鉑類耐藥的分子靶點(diǎn)意義重大。前期研究中發(fā)現(xiàn)新型E3泛素連接酶HECTD3可保護(hù)細(xì)胞避免凋亡，并且在乳腺癌和宮頸癌中與鉑類耐藥相關(guān)。本文將對HECTD3在卵巢癌中的表達(dá)及參與鉑類耐藥的調(diào)控機(jī)制進(jìn)行研

2、究。
　　方法:研究分四步進(jìn)行，采用的實(shí)驗(yàn)方法包括，1）收集2007年5月至2013年1月我院初治的晚期卵巢漿液性腺癌150例納入回顧性研究，手術(shù)標(biāo)本制作成組織芯片。通過免疫組化染色(IHC)評價卵巢癌組織中HECTD3表達(dá)與其他臨床-病理因素的相關(guān)性;通過隨訪進(jìn)行生存統(tǒng)計，并采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行預(yù)后單因素分析，Cox回歸模型行進(jìn)行預(yù)后多因素分析。2）采用蛋白印跡法(WB)對比SKO

3、V3及順鉑誘導(dǎo)的耐藥細(xì)胞系SKOV3R(DDP)中HECTD3的表達(dá)差異。通過流式檢測上述兩種細(xì)胞系對卡鉑誘導(dǎo)的凋亡差異。構(gòu)建HECTD3敲降的穩(wěn)轉(zhuǎn)SKOV3R及對照細(xì)胞系，應(yīng)用AnnexinⅤ/PI雙染法通過流式細(xì)胞術(shù)檢測敲降株與對照株對卡鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的差異。用上述細(xì)胞系構(gòu)建小鼠皮下荷瘤模型，給予卡鉑治療，對比腫瘤的抑制效果。3）選用Her2抑制劑（Lapatinib，Neratinib和Herceptin）分別處理SKOV3、SK

4、OV3R和A2780細(xì)胞系，WB檢測HECTD3和pSTAT3的表達(dá)情況。隨后，應(yīng)用siRNA在SKOV3和A2780細(xì)胞中瞬時敲降Her2，并通過WB檢測Her2、HECTD3和pSTAT3的表達(dá)情況。進(jìn)一步在組織水平通過IHC分析HECTD3與Her2的表達(dá)相關(guān)性。此外，在SKOV3細(xì)胞系中分別敲降STAT3及過表達(dá)STAT3，并通過WB檢測pSTAT3和HECTD3的表達(dá)情況。后通過雙熒光素酶報告基因檢測法定位STAT3影響HEC

5、TD3啟動子活性的序列。4）選用SKOV3細(xì)胞分別給予卡鉑單藥、拉帕替尼單藥及聯(lián)合藥物處理，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡差異;進(jìn)而用SKOV3細(xì)胞系構(gòu)建小鼠皮下荷瘤模型，給予同上分組藥物處理，治療結(jié)束后剖取腫瘤大小對比拉帕替尼與卡鉑聯(lián)合與任一單藥的抑制效果差異。
　　結(jié)果:本研究發(fā)現(xiàn)，1）卵巢漿液性腺癌組織芯片IHC評分與臨床病理資料分析結(jié)果顯示鉑敏感或鉑耐藥復(fù)發(fā)與HECTD3的表達(dá)水平密切相關(guān)(P＜0.01)。在卵巢漿液性腺癌中H

6、ECTD3表達(dá)高，預(yù)后差。多因素分析結(jié)果顯示HECTD3的表達(dá)水平(P＜0.05)、FIGO分期(P＜0.05)和殘存腫瘤大小(P＜0.05)是PFS的獨(dú)立預(yù)后影響因素;僅HECTD3的表達(dá)水平(P＜0.05)是OS的獨(dú)立影響因素。2）在細(xì)胞水平研究發(fā)現(xiàn)，SKOV3R細(xì)胞系中HECTD3的表達(dá)顯著高于其親本SKOV3細(xì)胞系，且SKOV3R較SKOV3對卡鉑具有耐藥性。體外研究結(jié)果顯示，敲降HECTD3可提高SKOV3R對卡鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋

7、亡;在體內(nèi)研究中同樣觀察到HECTD3表達(dá)降低可一定程度逆轉(zhuǎn)SKOV3R對卡鉑的敏感性。3）耐藥機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，Her2-STAT3信號通路參與調(diào)控HECTD3的表達(dá)，WB檢測發(fā)現(xiàn)抑制Her2可協(xié)同降低pSTAT3和HECTD3的表達(dá)水平。并證實(shí)STAT3可調(diào)節(jié)HECTD3的轉(zhuǎn)錄活性。此外，在組織水平通過IHC驗(yàn)證Her2與HECTD3表達(dá)呈正相關(guān)（spearman相關(guān)系數(shù)為0.214，P=0.007）。4）拉帕替尼聯(lián)合高/低濃度的卡鉑較

8、卡鉑單藥在體外可顯著促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的凋亡(A2780: CBP-HP=0.047; SKOV3: CBP-L P=0.045，CBP-H P=0.032)。拉帕替尼聯(lián)合卡鉑較任一單藥在體內(nèi)亦可顯著抑制卵巢癌腫瘤生長(CBP+L vs CBP P＜0.0001, CBP+L vs L P=0.0001)。
　　結(jié)論:綜上所述，HECTD3的表達(dá)與鉑類耐藥呈現(xiàn)正相關(guān)，是影響卵巢漿液性腺癌預(yù)后的獨(dú)立因素。降低HECTD3表達(dá)可提高卵巢癌

9、對鉑類藥物的敏感性。此外，HECTD3可通過STAT3接受Her2的正向調(diào)控，且在組織水平HECTD3與Her2表達(dá)呈正相關(guān)。Her2抑制劑可通過這一通路為鉑類治療增敏。因此，HECTD3具有作為卵巢漿液性腺癌分子標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)的潛質(zhì)。
　　第二部分 保留盆腔自主神經(jīng)的宮頸癌根治術(shù)應(yīng)用于局部晚期宮頸癌的臨床研究
　　目的:評價Q-M分型體系中保留盆腔自主神經(jīng)的宮頸癌根治術(shù)(Nerve sparing radicalhyst

10、erectomy, NSRH)在局部晚期宮頸癌治療中的安全性及對預(yù)后的影響。
　　方法:采用回顧性隊(duì)列研究方法收集2008年1月至2014年12月于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院接受開腹NSRH（69例）和開腹傳統(tǒng)宮頸癌根治術(shù)（RH，320例）的局部晚期（Ⅰb2和Ⅱa2期）宮頸癌患者的臨床病理資料及手術(shù)參數(shù)，中位隨訪67個月，評價預(yù)后及術(shù)后膀胱功能恢復(fù)情況。
　　結(jié)果:兩組病例基本參數(shù)匹配，(1)多因素預(yù)后分析結(jié)果顯示盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

11、是影響局部晚期宮頸癌患者DFS（HR=1.31，95％CI為1.01～1.68，P=0.040）和OS(HR=1.30，95％CI為1.01～1.67，P=0.046)的獨(dú)立預(yù)后危險因素。(2)手術(shù)保留盆腔自主神經(jīng)與否對局部晚期宮頸癌的無疾病進(jìn)展生存(P=0.746)和總生存(P=0.910)均沒有影響;(3)對比RH組，NSRH組手術(shù)時間雖明顯延長(262±51min vs.245±52min，P＜0.01)，但出血量少（366±30