第一部分：血清miRNA-206預(yù)測(cè)中晚期宮頸鱗狀細(xì)胞癌同步放化療抵抗的價(jià)值第二部分術(shù)中腹腔細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性對(duì)臨床早期宮頸腺癌患者預(yù)后的意義.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述:
　　第一部分 血清miRNA-206預(yù)測(cè)中晚期宮頸鱗狀細(xì)胞癌同步放化療抵抗的價(jià)值
　　目的:宮頸癌(Cervival Carcinoma)是世界范圍內(nèi)女性最常見(jiàn)的惡性生殖系統(tǒng)腫瘤之一。在我國(guó)，ⅡB期以上的中晚期患者約占60％-70％。在臨床中，部分同樣接受標(biāo)準(zhǔn)的同步放化療(Concurrent Chemoradiotherapy，CCRT)的患者，其治療預(yù)后卻存在較大的差異。究其原因，從臨床

2、病理因素方面分析，患者對(duì)于同步放化療反應(yīng)的不同，可能與以下因素相關(guān)，包括病理分型、臨床期別、療前血清鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原(Squamous Cell Carcinoma Antigen，SCC)水平、腫瘤大小、分化程度以及盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等相關(guān)。然而，有少部分臨床病理因素相似的患者對(duì)于CCRT的反應(yīng)也存在較大的差異，這提示了治療反應(yīng)的差異可能與腫瘤的內(nèi)在敏感性相關(guān)。近年來(lái)，miRNA（microRNA，微小核糖核酸）因其特殊的穩(wěn)定性及特異性

3、，在腫瘤分子診斷標(biāo)志物方面有明顯的優(yōu)越性。其中，循環(huán)miRNA備受關(guān)注，即存在于血液和體液中的miRNA，具有取材便捷、相對(duì)無(wú)創(chuàng)、性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)勢(shì)，臨床推廣前景較好，日漸成為研究的熱點(diǎn)。我們課題組前期采用血清標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)miRNA研究，已使用芯片篩選出CCRT敏感組與抗拒組的中晚期宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者之間血清miRNA差異表達(dá)譜，現(xiàn)擬繼續(xù)擴(kuò)大血清樣本進(jìn)行驗(yàn)證，分析其與臨床預(yù)后的相關(guān)性，為驗(yàn)證與CCRT反應(yīng)相關(guān)的生物標(biāo)志物，并為今后進(jìn)一步探索

4、能夠針對(duì)CCRT抵抗的治療新靶點(diǎn)打下基礎(chǔ)。
　　方法:收集2013年9月至2015年11月期間在中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院婦科后裝接受同步放化療的FIGO（2009版）分期為ⅡB～ⅢB期的中晚期宮頸鱗癌患者的治療前血清標(biāo)本。以治療結(jié)束后12個(gè)月為標(biāo)準(zhǔn)，在12個(gè)月內(nèi)腫瘤持續(xù)或出現(xiàn)進(jìn)展，或發(fā)現(xiàn)了新生腫瘤病灶者納入CCRT抗拒組，而12個(gè)月內(nèi)未發(fā)現(xiàn)腫瘤證據(jù)者納入CCRT敏感組。結(jié)合患者臨床病理資料以及隨訪(fǎng)結(jié)果，挑選臨床病理因素高度匹配的患者

5、20例（CCRT抗拒組和敏感組各10例），進(jìn)行microRNA表達(dá)譜芯片篩選，篩選出兩組中表達(dá)具有差異（變化兩倍以上）的microRNAs作為候選。采用RQ manager1.2和Data Asist V2.0軟件分析篩選得到兩組間差異表達(dá)顯著(P＜0.05)的microRNAs。進(jìn)一步在131例患者血清中采用實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)候選microRNAs進(jìn)行擴(kuò)大樣本量驗(yàn)證。結(jié)合患者臨床病理資料及隨訪(fǎng)結(jié)果，分析候選microRNAs表達(dá)水平與腫

6、瘤放化療抵抗以及各種臨床病理因素之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:前期的篩選階段結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CCRT抗拒組和敏感組間差異表達(dá)的microRNAs共214個(gè)，其中有顯著性差異表達(dá)的microRNAs（變化倍數(shù)大于2倍且P＜0.05）有3個(gè):miR-136-5p（以敏感組為標(biāo)準(zhǔn)，抗拒組下調(diào)）、miR-152-3P（抗拒組上調(diào)）和miR-206（抗拒組上調(diào)）。經(jīng)過(guò)我們后期的預(yù)實(shí)驗(yàn)的初步驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，miR-136-5p和miR-152-3P在血清樣本中

7、表達(dá)量極低，在不進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增的情況下無(wú)法檢測(cè)到，而其中只有miR-206能夠被檢測(cè)。考慮到實(shí)驗(yàn)的可操作性和今后臨床的應(yīng)用價(jià)值，我們選擇血清miR-206作為目標(biāo)miRNA，進(jìn)一步在131例血清樣本中進(jìn)行了驗(yàn)證，其結(jié)果顯示:血清miR-206（抗拒組上調(diào)）在CCRT敏感組與抗拒組的表達(dá)差異明顯，其表達(dá)為:敏感組2.715±0.2115vs抗拒組14.64±1.184，且其之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0001)。血清miRNAs的表達(dá)水平

8、與臨床病理因素的相關(guān)性分析顯示血清miR-206高表達(dá)與腫瘤期別高及局部腫瘤大相關(guān)。進(jìn)行單因素分析顯示血清miR-206的表達(dá)水平、腫瘤分化以及盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是無(wú)復(fù)發(fā)間隔時(shí)間(Disease Free Survival，DFS)的獨(dú)立預(yù)后因素(P=0.008，0.000，0.000)。Cox多因素回歸模型分析顯示血清miR-206表達(dá)水平是患者DFS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。使用ROC曲線(xiàn)分析血清miRNA-206預(yù)測(cè)患者CCRT治療結(jié)局的AUC

9、(Area UnderCurve)為91.3％（敏感性79.3％，特異性92.2％）。
　　結(jié)論:CCRT抵抗的中晚期宮頸鱗癌患者血清miR-206高表達(dá);血清miR-206表達(dá)水平與患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。單獨(dú)使用血清miR-206預(yù)測(cè)患者治療結(jié)局的準(zhǔn)確性高于使用臨床病理因素的預(yù)測(cè)。這些結(jié)果均提示血清miRNA-206有可能作為新型分子標(biāo)志物用于篩選中晚期宮頸鱗癌CCRT抗拒的患者。
　　第二部分 術(shù)中腹腔細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性對(duì)臨床早期宮

10、頸腺癌患者預(yù)后的意義
　　目的:宮頸癌是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤，病理類(lèi)型主要包括宮頸鱗癌和宮頸腺癌。宮頸腺癌較宮頸鱗癌少見(jiàn)，但近年來(lái)有上升趨勢(shì)，約占到原發(fā)性宮頸癌的20％。宮頸癌的分期標(biāo)準(zhǔn)不同于卵巢癌與子宮內(nèi)膜癌，不是通過(guò)手術(shù)病理進(jìn)行分期，而是通過(guò)治療前的臨床檢查（婦科檢查+影像學(xué)檢查）分期。因此，術(shù)中腹腔細(xì)胞學(xué)檢查一直未列入宮頸癌的分期指南中，且目前對(duì)于宮頸癌的治療沒(méi)有明確的指導(dǎo)意義。自從1970年Creasman等第一次報(bào)道腹腔細(xì)

11、胞學(xué)檢查在宮頸癌中的意義，此后相關(guān)研究逐漸增多，但是眾多的結(jié)果并不一致。多數(shù)學(xué)者的研究結(jié)果表明，腹腔細(xì)胞學(xué)檢查在宮頸鱗癌患者的預(yù)后中無(wú)明確意義。但在宮頸腺癌中，術(shù)中腹腔細(xì)胞學(xué)檢查是否是一項(xiàng)有意義的臨床預(yù)后因素，是否對(duì)于治療有指導(dǎo)價(jià)值，目前尚無(wú)定論。本研究擬通過(guò)回顧性分析于2000年12月1日至2015年12月31日期間在我院接受了手術(shù)治療，并在術(shù)中留取腹腔細(xì)胞學(xué)檢查的136例臨床早期宮頸腺癌患者的臨床病理資料及預(yù)后情況，旨在探討術(shù)中腹腔

12、細(xì)胞學(xué)結(jié)果陽(yáng)性在臨床早期宮頸腺癌患者預(yù)后中的意義。
　　方法:回顧性分析2000年12月1日至2015年12月31日期間在中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院接受手術(shù)治療，并在術(shù)中留取腹腔細(xì)胞學(xué)檢查的136例早期宮頸腺癌患者的臨床資料及隨訪(fǎng)資料。分析術(shù)中腹腔細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性與患者臨床病理因素之間的關(guān)系，并通過(guò)Kaplan-Meier法和Cox回歸模型來(lái)分析術(shù)中陽(yáng)性腹腔細(xì)胞學(xué)在患者預(yù)后中的意義。
　　結(jié)果:共有136名患者符合入組標(biāo)準(zhǔn)并具有完整的

13、隨訪(fǎng)資料。其中術(shù)中腹腔細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性的患者有13例(9.6％)，陰性患者123例(90.4％)。在這136例患者中，術(shù)中腹腔細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性和陰性患者的5年總生存(5-year Overall Survival)率分別為69.2％和95.7％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。3年無(wú)復(fù)發(fā)生存率(3-yearRecurrence Free Survival, RFS)在術(shù)中腹腔細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性和陰性?xún)山M患者中分別是76.2％和91.3％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

14、義(P=0.041)。分析結(jié)果顯示，術(shù)中腹腔細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性患者的復(fù)發(fā)率較陰性患者的復(fù)發(fā)率高，分層分析顯示，兩組間的差異在總復(fù)發(fā)率(P=0.002)、局部復(fù)發(fā)率(P=0.012)中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.15)。Cox回歸模型分析顯示術(shù)中腹腔細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性不是臨床早期宮頸腺癌患者獨(dú)立的預(yù)后因素，而盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和宮旁受累與患者的預(yù)后顯著相關(guān)。
　　結(jié)論:在臨床早期宮頸腺癌患者中，術(shù)中腹腔細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性雖然不是患者預(yù)后