弓形蟲不同發(fā)育期、不同蟲株卵囊比較蛋白質(zhì)組及不同蟲株速殖子比較修飾蛋白質(zhì)組的研究.pdf

1、弓形蟲是專性細(xì)胞內(nèi)寄生的頂復(fù)門原蟲，具有復(fù)雜的兩宿主生活史，速殖子和包囊是其在中間宿主體內(nèi)產(chǎn)生的兩種形態(tài)，卵囊是終末宿主體內(nèi)產(chǎn)生的形態(tài)。弓形蟲分為四種主要的基因型(Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ和12型)，中國1型（Chinese1，ToxoDB＃9）是中國大陸占主導(dǎo)地位的基因型，不同基因型的分布和對(duì)宿主的致病性有較大差異。本課題應(yīng)用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，對(duì)弓形蟲不同發(fā)育期、不同蟲株孢子化卵囊的蛋白質(zhì)組和不同蟲株速殖子的磷酸化修飾和乙?；?/p>

2、修飾蛋白質(zhì)組進(jìn)行了研究。
　　應(yīng)用iTRAQ技術(shù)研究了Ⅱ型(ToxoDB＃1)PRU蟲株速殖子、包囊、孢子化卵囊三種不同發(fā)育階段的比較蛋白質(zhì)組。毒力因子和核糖體蛋白呈現(xiàn)出獨(dú)特的表達(dá)方式，毒力因子在孢子化卵囊階段表達(dá)量最高，包囊次之，速殖子最低。孢子化卵囊和包囊與速殖子相比，分別有33個(gè)、46個(gè)核糖體蛋白上調(diào)表達(dá)，無核糖體蛋白下調(diào)表達(dá)，這可能與孢子化卵囊和包囊的宿主適應(yīng)性有關(guān)。
　　應(yīng)用iTRAQ技木研究了Ⅱ型(ToxoDB＃

3、1)PRU蟲株和ToxoDB＃9PYS蟲株孢子化卵囊的比較蛋白質(zhì)組。與PYS蟲株相比，PRU蟲株2個(gè)毒力因子上調(diào)表達(dá)，13個(gè)毒力因子下調(diào)表達(dá)，10個(gè)與孢子化卵囊對(duì)外界環(huán)境抵抗力相關(guān)的卵囊壁蛋白上調(diào)表達(dá)，3個(gè)卵囊壁蛋白下調(diào)表達(dá)，提示PRU蟲株和PYS蟲株孢子化卵囊在毒力和對(duì)外界環(huán)境抵抗力方面存在差異。
　　應(yīng)用定量磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，研究了不同基因型弓形蟲速殖子之間的磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)差異。共鑒定到759個(gè)磷酸化蛋白，在RH

4、/PRU組、PRU/PYS組、PYS/RH組中分別鑒定到392個(gè)、298個(gè)和436個(gè)差異磷酸化蛋白。在RH/PRU組、PRU/PYS組、PYS/RH組中分別有3個(gè)基序、3個(gè)基序、5個(gè)基序差異表達(dá)，這在一定程度上揭示了弓形蟲不同基因型速殖子表達(dá)激酶種類和激酶識(shí)別底物特性的差異。
　　應(yīng)用非標(biāo)記定量乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)，研究了不同基因型弓形蟲速殖子之間的乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)差異。共獲得566個(gè)乙?；鞍祝赗H/PRU組、PRU/

5、PYS組、PYS/RH組中分別鑒定到15個(gè)、3個(gè)和26個(gè)差異乙?；鞍?。與PYS蟲株和PRU蟲株相比，RH蟲株速殖子中的組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶和甘氨酰-tRNA合成酶上調(diào)表達(dá)，這在一定程度上反映了不同蟲株弓形蟲應(yīng)對(duì)外界壓力和發(fā)育萬面的差異。
　　綜上所述，本課題首次對(duì)弓形蟲Ⅱ型(ToxoDB＃1)PRU蟲株不同發(fā)育期的比較蛋白質(zhì)組、Ⅱ型(ToxoDB＃1)PRU蟲株和ToxoDB＃9PYS蟲株孢子化卵襄的比較蛋白質(zhì)組，以及Ⅰ型(Toxo