RAGE在AGEs誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞分泌炎癥因子TNF-α和IFN-γ中的作用.pdf

1、目的：研究表明，AGEs和RAGE在糖尿病慢性并發(fā)癥中起重要作用，糖尿病并發(fā)癥多表現(xiàn)血管炎癥損傷，因?yàn)門淋巴細(xì)胞與炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)和調(diào)節(jié)過(guò)程密切相關(guān)，推測(cè)AGEs可能影響T淋巴細(xì)胞的免疫功能。本研究觀察AGEs對(duì)Jurkat細(xì)胞（CD4+T細(xì)胞）表面RAGE表達(dá)、炎癥因子分泌及相關(guān)信號(hào)通路的影響。這些研究可進(jìn)一步闡明AGEs和RAGE在血管炎癥免疫損傷中的作用機(jī)制，為治療糖尿病慢性并發(fā)癥提供新靶點(diǎn)。
　　 方法：①常規(guī)制備AGEs

2、，MTT法觀察不同濃度AGEs或BSA（0～200μg/ml）對(duì)PHA（0.25μg/ml）預(yù)刺激的Jurkat細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。②不同濃度AGEs或BSA（0～200μg/ml）作用于PHA（0.25μg/ml）預(yù)刺激的Jurkat細(xì)胞24h，Western Blot檢測(cè)RAGE表達(dá)的變化；ELISA檢測(cè)炎癥因子TNF-α和IFN-γ的分泌。同時(shí)為觀察RAGE在AGEs誘導(dǎo)的炎癥因子分泌中的作用，用RAGE抗體預(yù)先處理Jurkat細(xì)胞2

3、4h，再予AGEs干預(yù)，設(shè)非特異IgG2a為對(duì)照。③為研究RAGE介導(dǎo)的胞內(nèi)信號(hào)，相同濃度（200μg/ml）AGEs或BSA作用于PHA預(yù)刺激后的Jurkat細(xì)胞0、15、30、60min，免疫熒光（普通熒光顯微鏡及激光共聚焦顯微鏡）檢測(cè)CaMKIV的核轉(zhuǎn)位；同時(shí)觀察anti-RAGE對(duì)CaMKIV活化的影響。
　　 結(jié)果：①濃度50～200μg/ml的AGEs作用于PHA預(yù)刺激的Jurkat細(xì)胞24h后，MTT結(jié)果顯示細(xì)胞的

4、生存率無(wú)明顯變化（P>0.05）。②不同濃度AGEs或BSA作用于PHA預(yù)刺激的Jurkat細(xì)胞，Western Blot結(jié)果顯示BSA對(duì)RAGE表達(dá)無(wú)明顯影響，而AGEs可上調(diào)RAGE的表達(dá)，與BSA組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（濃度50組P<0.05，濃度100、200組P<0.01）。③200μg/mlAGEs或BSA作用于Jurkat細(xì)胞不同時(shí)間后，ELISA結(jié)果顯示AGEs可促進(jìn)其分泌炎癥因子TNF-α及IFN-γ，24h達(dá)高峰。不

5、同濃度AGEs作用24h后，可促使Jurkat細(xì)胞上調(diào)炎癥因子TNF-α及IFN-γ表達(dá)（P<0.01）；anti-RAGE預(yù)處理細(xì)胞后，AGEs誘導(dǎo)的炎癥因子表達(dá)減少，與AGEs處理組比較P<0.01。④免疫熒光結(jié)果顯示AGEs處理Jurkat細(xì)胞30min后可促進(jìn)CaMKIV蛋白核轉(zhuǎn)位，而B(niǎo)SA組未觀察到明顯的核轉(zhuǎn)位；anti-RAGE預(yù)處理后，AGEs誘導(dǎo)的蛋白核轉(zhuǎn)位減少，熒光減弱。
　　 結(jié)論：AGEs可上調(diào)Jurkat