LHA-DVC Orexin-A通路構(gòu)成及對(duì)胃牽張敏感神經(jīng)元放電活動(dòng)和胃運(yùn)動(dòng)調(diào)控研究.pdf

1、目的：Orexin-A作為一種新型神經(jīng)肽，具有廣泛的生理作用，可調(diào)節(jié)攝食、能量代謝、睡眠-覺(jué)醒及胃腸運(yùn)動(dòng)等生理活動(dòng)，但orexin-A對(duì)胃運(yùn)動(dòng)調(diào)控機(jī)制還未明確。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)觀察orexin-A對(duì)大鼠迷走神經(jīng)復(fù)合體（DVC）胃牽張敏感神經(jīng)元（GD）放電活動(dòng)的影響，以及下丘腦外側(cè)區(qū)（LHA）對(duì)其調(diào)控作用，并通過(guò)逆行追蹤結(jié)合免疫組化實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步闡述LHA-DVC間可能存在orexin-A神經(jīng)及功能通路。
　　方法：逆行追蹤技術(shù)結(jié)合熒光免疫

2、組化染色，觀察LHA-DVC間orexin-A神經(jīng)通路的構(gòu)成；采用細(xì)胞外放電記錄，觀察DVC微量注射orexin-A對(duì)GD放電活動(dòng)的影響及可能機(jī)制；通過(guò)在體胃運(yùn)動(dòng)研究，觀察DVC微量注射orexin-A對(duì)清醒自由活動(dòng)大鼠胃收縮幅度和頻率的影響，以及對(duì)大鼠胃液及胃酸分泌的影響及機(jī)制。
　　結(jié)果：逆行追蹤結(jié)合免疫熒光染色研究發(fā)現(xiàn)，LHA內(nèi)有orexin-A/熒光金（FG）雙標(biāo)神經(jīng)元；電生理實(shí)驗(yàn)顯示，DVC內(nèi)共記錄到96個(gè)GD敏感神經(jīng)元

3、，其中58個(gè)為GD-E神經(jīng)元，38個(gè)為GD-I神經(jīng)元。DVC微量注射orexin-A，有36個(gè)GD-E神經(jīng)元放電頻率明顯增強(qiáng)（P＜0.01），而24個(gè)GD-I神經(jīng)元放電頻率明顯減弱（P＜0.01）；大鼠 DVC內(nèi)預(yù)先微量注射orexin-A選擇性受體拮抗劑SB334867，orexin-A對(duì)GD-E神經(jīng)元放電興奮效應(yīng)可被完全阻斷（P＜0.05），同樣，對(duì)GD-I神經(jīng)元放電抑制效應(yīng)也可被完全阻斷（P＜0.05）。電刺激LHA，在DVC記錄

4、到的36個(gè)orexin-A敏感性GD-E神經(jīng)元中有24個(gè)放電頻率顯著增加（P<0.05）；而24個(gè)orexin-A敏感性GD-I神經(jīng)元中16個(gè)放電頻率也增加（P<0.05）。但預(yù)先DVC內(nèi)注射SB334867，再電刺激LHA，GD-E神經(jīng)元放電頻率較前明顯下降（P＜0.01），GD-I神經(jīng)元放電頻率也顯著降低（P＜0.05）。在體胃運(yùn)動(dòng)研究結(jié)果顯示，DVC微量注射orexin-A，大鼠胃收縮幅度以及收縮頻率明顯升高，且呈明顯劑量依賴關(guān)系