BMP-7對(duì)胚胎小鼠髓核細(xì)胞成骨分化和Notch信號(hào)表達(dá)的表達(dá).pdf

1、目的：
　　探索骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7，BMP-7）誘導(dǎo)胚胎小鼠椎間盤髓核細(xì)胞(nucleus pulposus，NP)的成骨分化及對(duì)經(jīng)典Notch信號(hào)通路的調(diào)控作用。
　　方法：
　　重組腺病毒BMP-7、GFP、Jag-1、和RFP在HEK293細(xì)胞中擴(kuò)增，感染NP細(xì)胞。RT-PCR檢測(cè)BMP-7的mRNA水平表達(dá);Real-time PCR檢測(cè)成骨指標(biāo)骨橋蛋白

2、(osteopontin，OPN)、骨保護(hù)素(osteoprotegerin，OPG)以及經(jīng)典Notch信號(hào)通路分子的mRNA表達(dá)水平;Western blot檢測(cè)成骨轉(zhuǎn)錄因子Runx2和OPN的蛋白表達(dá)水平;采用堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)讀數(shù)和ALP染色檢測(cè)ALP活性。
　　結(jié)果：
　　Ad-BMP-7、Ad-GFP、 Ad-Jag-1和Ad-RFP在HEK293細(xì)胞中高滴度的擴(kuò)增。NP

3、細(xì)胞中BMP-7的基礎(chǔ)表達(dá)很低，Ad-BMP-7感染NP細(xì)胞可高表達(dá)BMP-7，并顯著提高OPN、OPG的mRNA水平表達(dá)(OPN: P=0.000;OPG: P=0.012)，成骨轉(zhuǎn)錄因子Runx2及OPN的蛋白表達(dá)水平也均高于對(duì)照組，特異性成骨指標(biāo)ALP的活性明顯增強(qiáng)，ALP染色呈紫藍(lán)色，顯著高于對(duì)照組(P=0.000)。Ad-BMP-7感染3d可促進(jìn)Notch信號(hào)通路Notch-1、Notch-2、Jag-1、Hey-1的mRNA

4、水平表達(dá)增高（Notch-1:P=0.002;Notch-2:P=0.000;Jag-1: P=0.000; Hey-1:P=0.000），但第7d回復(fù)到基礎(chǔ)表達(dá)水平，其余信號(hào)分子表達(dá)無(wú)明顯差異。Ad-Jag-1進(jìn)一步活化Notch信號(hào)通路后，Ad-BMP-7+Ad-Jag-1組的Runx2和OPN的蛋白表達(dá)水平以及ALP活性明顯增加，較對(duì)照組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。
　　結(jié)論：
　　腺病毒介導(dǎo)的BMP-7可誘導(dǎo)N