薩福克羊和哈薩克羊Toll樣受體7基因SSCP多態(tài)性與綿羊肺腺瘤病的相關(guān)性分析.pdf

1、Toll樣受體(TLR)是一類模式識別受體家族，能夠啟動天然免疫和獲得性免疫。其中TLR7基因位于細(xì)胞內(nèi)，其廣泛存在于多種免疫細(xì)胞中，并且在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用，與許多感染性疾病的抗性、易感性、免疫應(yīng)答相關(guān)。本實驗對薩?？搜蚝托陆_克羊TLR7基因進行PCR-SSCP多態(tài)性分析，探索Toll7基因突變與綿羊肺腺瘤病易感性關(guān)系，探討綿羊不同基因型個體在人工感染綿羊肺腺瘤病毒過程中的免疫應(yīng)答反應(yīng)，通過對TLR7基因多態(tài)性和OPA感染的免

2、疫應(yīng)答關(guān)系研究，為綿羊抗病育種研究提供參考依據(jù)。人工感染OPA也可以為人類的肺癌提供動物模型，更好的為研究人類肺癌提供理論依據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴利用PCR-SSCP方法對薩?？搜蚝凸_克羊TLR7基因進行多態(tài)性分析。結(jié)果表明TLR7基因胞外區(qū)具有多態(tài)性。薩?？搜駿CD-2、ECD-5、ECD-6、ECD-7區(qū)存在多態(tài)性，哈薩克羊ECD-2和ECD-7區(qū)存在突變。經(jīng)測序分析發(fā)現(xiàn)薩?？搜蛴?個點突變，其中3個錯義突變，2個

3、同義突變。而哈薩克羊只有3個突變，其中2個錯義突變，1個同義突變。薩?？搜駿CD-2區(qū)SSCP分析發(fā)現(xiàn)處于哈迪溫伯格不平衡狀態(tài)，且突變帶型BB、AB型，哈薩克羊BB型感染內(nèi)源性綿羊肺腺瘤病毒的陽性頻率高于正常型，這幾種基因型測序后發(fā)現(xiàn)其中343位和350位核苷酸發(fā)生突變，同時具有兩個突變的羊感染內(nèi)源性綿羊肺腺瘤病毒陽性率高于陰性的羊。推測A343G、A350G的突變可能與病毒易感性有關(guān)。⑵TLR7核苷酸A343G和A350G突變的羊與非

4、突變羊進行人工感染綿羊肺腺瘤病毒實驗，血常規(guī)檢測發(fā)現(xiàn)攻毒后第二天，體內(nèi)炎性細(xì)胞數(shù)量到達最高值， ELISA檢測IFN-γ、IL-1β、TNF-α、MyD88、TLR7在血清中的表達水平，發(fā)現(xiàn)突變組的表達水平略高于非突變組。但差異不顯著（P＞0.05）。可能是由于突變組的炎性反應(yīng)中有更多的致炎因子參與對病毒的抵抗，其免疫反應(yīng)更加活躍。⑶突變組和非突變組攻毒5個月后進行病理剖檢觀察和組織學(xué)觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)突變組羊有OPA的癥狀，肺臟表面有很多