圓錐動(dòng)脈干畸形患兒染色體異常及相關(guān)基因多態(tài)性研究.pdf

1、先天性心臟病(簡(jiǎn)稱先心病)是兒童最常見(jiàn)的先天性畸形之一，嚴(yán)重影響患兒生存率以及生存質(zhì)量。圓錐動(dòng)脈干畸形是一類復(fù)雜性先心病，可以導(dǎo)致新生兒時(shí)期出現(xiàn)低氧血癥和難以糾正的酸中毒，引起患兒早期死亡。圓錐動(dòng)脈干畸形的發(fā)病機(jī)制已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。先心病是多基因與環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，遺傳因素日益受到重視。研究證實(shí)，圓錐動(dòng)脈干畸形是22q11微缺失綜合征最常見(jiàn)的心臟表現(xiàn)，而部分圓錐動(dòng)脈干畸形患者存在22q11微缺失。位于22q11微缺失片段的TBX1

2、和HIRA等基因在動(dòng)物模型中均證實(shí)與圓錐動(dòng)脈干畸形有關(guān)，被認(rèn)為是圓錐動(dòng)脈干畸形發(fā)病的候選基因。然而，盡管22q11微缺失綜合征患者普遍表現(xiàn)有圓錐動(dòng)脈干畸形，但是對(duì)于單純圓錐動(dòng)脈干畸形與22q11微缺失的研究結(jié)果并不一致，此外，在人類圓錐動(dòng)脈干畸形與22q11微缺失片段上的相關(guān)基因的研究還非常有限。本課題重點(diǎn)研究圓錐動(dòng)脈干畸形患兒的染色體異常、22q11微缺失以及該微缺失片段上相關(guān)基因包括 TBX1和HIRA的多態(tài)性，探討人類圓錐動(dòng)脈干畸

3、形與染色體異常和相關(guān)基因多態(tài)性的關(guān)系，為深入研究圓錐動(dòng)脈干畸形的發(fā)生機(jī)制提供依據(jù)和基礎(chǔ)。
　　 第一部分、4046例染色體檢查與先天性心臟病關(guān)系的回顧性分析
　　 目的：分析染色體核型異常與先心病的關(guān)系。
　　 方法：采用病例回顧性方法分析我院從1990年1月至2006年12月所進(jìn)行染色體檢查的患兒中染色體核型異常的種類，并統(tǒng)計(jì)先天性心臟病患兒染色體核型的特點(diǎn)以及染色體核型異常患兒的先天性心臟病類型。
　　

4、 結(jié)果：
　　 1、4046例染色體檢測(cè)患兒中，染色體核型異常660例(16.32％)，先天性心臟病391例(9.66％)。
　　 2、21三體綜合癥是最常見(jiàn)的常染色體疾病，共458例，占染色體核型異?？倲?shù)的63.40％。先天性卵巢發(fā)育不良是最常見(jiàn)的性染色體疾病，共105例，占染色體核型異?？倲?shù)15.90％。
　　 3、660例染色體異?；純褐?，有185例先天性心臟病患兒。157例染色體核型表現(xiàn)為21三體綜合征

5、，其中133例(84.71％)心臟間隔類缺損。4例染色體核型表現(xiàn)為先天性卵巢發(fā)育不良綜合癥者，2例(50％)為主動(dòng)脈弓縮窄。
　　 4、391例先天性心臟病患兒中，染色體核型異常185例(41.31％)，3655例心臟結(jié)構(gòu)正常的兒童中，染色體核型異常475例(13.0％)(x2=304.7，P=0.000，0R=6.012，95％CI為4.822-7.497).105例圓錐動(dòng)脈干畸形患兒，染色體核型異常16例(15.24％)，而

6、286例非圓錐動(dòng)脈干畸形兒童中，染色體核型異常169例(59.1％)(x2=59.25，P=0.000，0R=8.035，95％CI為4.489-14.380)。
　　 小結(jié)：
　　 1、21-三體綜合征是最常見(jiàn)的常染色體畸形疾病，其最常見(jiàn)的心臟畸形是間隔類缺損；先天性卵巢發(fā)育不良綜合征是最常見(jiàn)的性染色體畸形疾病，其常見(jiàn)的心臟畸形可能是主動(dòng)脈縮窄。
　　 2、圓錐動(dòng)脈干畸形患兒染色體核型異常并不多見(jiàn)，提示應(yīng)用常規(guī)

7、染色體核型分析無(wú)法對(duì)這類嚴(yán)重復(fù)雜的先心病進(jìn)行產(chǎn)前篩查。
　　 第二部分、圓錐動(dòng)脈干畸形與22q11微缺失的關(guān)系
　　 目的：探討圓錐動(dòng)脈干畸形與22q11微缺失的關(guān)系。
　　 方法：選取91例圓錐動(dòng)脈干畸形患兒，采取患兒外周血2ml，對(duì)其外周血進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，制取染色體圖片，進(jìn)行染色體核型G帶分析。選用Vysis公司提供的Tuplel探針，應(yīng)用原位熒光雜交技術(shù)(FISH)進(jìn)行染色體微缺失檢測(cè)。
　　 結(jié)果：

8、
　　 1、91例圓錐動(dòng)脈干畸形患兒中，83例外周血染色體標(biāo)本進(jìn)行FISH實(shí)驗(yàn)成功，其疾病類型分布為肺動(dòng)脈閉鎖/室間隔缺損31例、法洛四聯(lián)癥24例、右心室雙出口10例、肺動(dòng)脈瓣狹窄7例、大動(dòng)脈轉(zhuǎn)位5例、動(dòng)脈單干4例、主動(dòng)脈縮窄1例以及主動(dòng)脈瓣狹窄1例。
　　 2、FISH共檢測(cè)出3例陽(yáng)性患兒，3例均為肺動(dòng)脈閉鎖/室間隔缺損，占所有病例數(shù)3.6％，占肺動(dòng)脈閉鎖的9.7％。
　　 小結(jié)：
　　 1、22q11

9、微缺失在肺動(dòng)脈閉鎖/室間隔缺損中發(fā)生率比其它圓錐動(dòng)脈干畸形高。
　　 2、FISH可以作為產(chǎn)前檢查22q11微缺失的方法，在孕早期檢出部分肺動(dòng)脈閉鎖/室間隔缺損等圓錐動(dòng)脈干畸形。
　　 第三部分、圓錐動(dòng)脈干畸形相關(guān)基因多態(tài)性研究
　　 目的：探討圓錐動(dòng)脈干畸形與22q11區(qū)段上相關(guān)基因(TBX1、HIRA)多態(tài)性的關(guān)系。
　　 方法：應(yīng)用PCR技術(shù)以及測(cè)序的方法，對(duì)203例圓錐動(dòng)脈干畸形患兒(法洛四聯(lián)癥8

10、7例、肺動(dòng)脈閉鎖49例、大動(dòng)脈轉(zhuǎn)位32例、右室雙出口29例以及動(dòng)脈單干6例)、150例簡(jiǎn)單先天性心臟病患兒和150例心臟結(jié)構(gòu)正常的健康兒童，檢測(cè)TBX1基因2857位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性，以及對(duì)HIRA外顯子5，25進(jìn)行測(cè)序。對(duì)TBX1基因2857位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性和HIRA2個(gè)外顯子上單核苷酸多態(tài)性與圓錐動(dòng)脈干畸形的關(guān)系進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、TBX1基因多態(tài)性分析
　　 TBX12857位點(diǎn)非CC基因

11、型(攜帶G等位基因)頻率在大動(dòng)脈轉(zhuǎn)位組是87.5％、正常對(duì)照組是75.3％(X2=4.821，P=0.028，0R=2.256，95％CI為1.079-4.718)；TBX12857位點(diǎn)G等位基因頻率在大動(dòng)脈轉(zhuǎn)位組是64.1％、正常對(duì)照組是47.4％(X2=5.159，P=0.023，0R=1.926，95％CI為1.093-3.393)。
　　 2、HIRA基因多態(tài)性分析
　　 (1)HIRA25983位點(diǎn)非CC基因型

12、(攜帶G等位基因)頻率在大動(dòng)脈轉(zhuǎn)位組是6.2％、簡(jiǎn)單先心病組15.3％(X2=4.310，P=0.038，0R=2.765，95％CI為1.026-7.449)，右室雙出口組是3.4％、簡(jiǎn)單先心病組15.3％(X2=8.791，P=0.003，0R=5.706，95％CI為1.597-20.368)，但是HIRA25983位點(diǎn)G等位基因在各組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (2)HIRA100308位點(diǎn)非GG基因型(攜帶A等位基因)頻率

13、在法洛四聯(lián)癥組是13.8％、正常對(duì)照組是3.3％(X2=7.779，P=0.005，0R=5.264，95％CI為1.463-18.937)，在動(dòng)脈單干組是16.7％(x2=10.889，P=0.001，0R=6.622，95％CI為1.874-23.391)。HIRA100308位點(diǎn)A等位基因頻率在法洛四聯(lián)癥組是8.6％、正常對(duì)照組是1.7％(X2=4.714，P=0.030，0R=4.846，95％CI為1.020-23.084)，

14、在動(dòng)脈單干組是16.7％。(X2=13.085，P=0.000，0R=10.036，95％CI為2.253-44.712)。
　　 (3)HIRA100598位點(diǎn)GG、GA和AA基因型及G/A等位基因頻率在各組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 小結(jié)：
　　 1、TBX12857位點(diǎn)G/C單核苷酸多態(tài)性可能與大動(dòng)脈轉(zhuǎn)位的遺傳易感性有關(guān)，G等位基因可能是大動(dòng)脈轉(zhuǎn)位的易感基因。
　　 2、HIRA100308位點(diǎn)G