黃芪甲苷對(duì)慢性心力衰竭大鼠心肌CTGF、TGFβ1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：采用腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)建立慢性心力衰竭大鼠模型，觀察黃芪甲苷對(duì)大鼠心肌組織中CTGF、TGFβ1表達(dá)的影響，初步研究黃芪甲苷對(duì)大鼠心肌纖維化的抑制作用以及改善心臟功能的作用是否通過(guò)抑制CTGF、TGFβ1的表達(dá)來(lái)發(fā)揮作用。
　　方法：采購(gòu)SD成年雄性大鼠120只，體重280g-320g，清潔級(jí)別，其中110只行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)操作，其余假手術(shù)組（10只）除不結(jié)扎外其他操作同腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)操作，腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)術(shù)后大鼠存活60只，隨機(jī)

2、分為假手術(shù)組、模型組、黃芪甲苷低劑量組(20 mg· kg-1·d-1)、黃芪甲苷中劑量(40 mg·kg-1·d-1)及黃芪甲苷高劑量(60 mg·kg-1·d-1)組、纈沙坦組(10mg·kg-1·d-1)，每組均為12只，假手術(shù)組全部存活。術(shù)后8周行心臟超聲和血流動(dòng)力學(xué)相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)提示慢心力衰竭模型建立后，給予相應(yīng)劑量的黃芪甲苷（黃芪甲苷組）、纈沙坦（纈沙坦組）、生理鹽水（假手術(shù)組、模型組），每日一次，總計(jì)持續(xù)4周。4周后行再次

3、完善心臟超聲以及血流動(dòng)力學(xué)相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)，取除心臟，游離左心室心肌，計(jì)算HW/BW、LVW/BW。心肌組織用于HE染色、Masson染色。光鏡下觀察心肌組織的形態(tài)學(xué)的變化以及心肌纖維化程度，并采用圖像處理系統(tǒng)計(jì)算各組大鼠心肌纖維化膠原容量比值(CVF)。采用RT-PCR方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)各組大鼠心肌組織中CTGFmRNA、TGFβ1mRNA的表達(dá)水平的變化。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)心肌組織中結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)、結(jié)締組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(T

4、GFβ1)的表達(dá)，并采用相關(guān)的圖像處理系統(tǒng)進(jìn)行定量分析。采用Western-bloting再次檢測(cè)心肌組織中CTGF、TGFβ1的表達(dá)，并應(yīng)用全能型ChemiDocMP成像分析系統(tǒng)處理圖像，用積分吸光度比值作為CTGF、TGFβ1的相對(duì)表達(dá)量。所有的計(jì)量資料數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行單因素方差分析（Oneway ANOVA）。P＜0.05表示為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.01表示為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

5、　　結(jié)果：(1)模型組大鼠精神萎靡、行動(dòng)遲緩、活動(dòng)后憋喘明顯、雙下肢水腫，其余各組癥狀、體征不明顯。(2)同假手術(shù)組相比，模型組大鼠血流動(dòng)力學(xué)以及心臟超聲相關(guān)指標(biāo)變化明顯，左室舒張末期壓力(LVEDP)、左室收縮壓(LVSP)、舒張末期室間隔厚度(IVSd)、左室后壁厚度(LVPWd)顯著上升(P＜0.01)。左室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dtmax)、左室內(nèi)壓最大下降速率（-dp/dtmax）、左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDd)下降明顯(

6、P＜0.01)，同模型組相比，黃芪甲苷各組LVEDP、LVSP、IVSd、LVPWd下降明顯（P＜0.05或P＜0.01）。+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVEDd上升明顯（P＜0.05或P＜0.01）。(3) HE染色以及Masson染色中，假手術(shù)組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊、邊界清晰、細(xì)胞大小一致，細(xì)胞明顯水腫以及肥大表現(xiàn)，細(xì)胞間質(zhì)無(wú)明顯纖維組織。模型組大鼠細(xì)胞排列紊亂，大小不一，細(xì)胞肥大明顯。黃芪甲苷各組較模型組改善明顯，表現(xiàn)

7、出明顯的劑量依賴(lài)性，CVF較模型組明顯下降（P＜0.05或P＜0.01）。(4) RT-PCR中，同假手術(shù)組相比，模型組CTGFmRNA、TGFβ1mRNA表達(dá)水平明顯上升(P＜0.01)。同模型組相比，黃芪甲苷各組CTGFmRNA、TGFβ1mRNA表達(dá)水平不同程度下降(P＜0.01或P＜0.01)。(5)在免疫組化以及蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)中，同假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌組織中CTGF、TGFβ1表達(dá)水平上升顯著(P＜0.01)。與模型

8、組相比，黃芪甲苷各組以及纈沙坦組大鼠心肌組織中CTGF、TGFβ1表達(dá)水平下降(P＜0.01或P＜0.05)。
　　結(jié)論：(1)采用腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)可于術(shù)后8周形成慢性心力衰竭大鼠模型，主要是機(jī)制增加心臟的后負(fù)荷實(shí)現(xiàn)的。(2)黃芪甲苷具有改善心功能、抑制心肌纖維化的作用，具體的作用機(jī)制可能與黃芪甲苷抑制CTGF、TGF-β1兩種生長(zhǎng)因子的表達(dá)有關(guān)。(3)黃芪甲苷具有抑制慢性心衰大鼠模型心肌組織中CTGF、TFGβ1的的表達(dá)，并呈現(xiàn)劑