Y27632，Taxol和db-cAMP聯(lián)合應(yīng)用促進(jìn)脊髓損傷后新生SD大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察Y27632，Taxol和db-cAMP聯(lián)合應(yīng)用在模擬脊髓損傷微環(huán)境下對(duì)于新生SD大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元軸突再生的影響。
　　方法：①成年雌性SD大鼠截癱改良Allen模型制作:實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組:手術(shù)組6只、假手術(shù)對(duì)照組6只、對(duì)照組6只;按改良Allen法制作T9完全性截癱模型，1w后取T8～T10脊髓通過分離、過濾形成組織勻漿制備脊髓提取液;②新生SD大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元分離、培養(yǎng)和鑒定;③實(shí)驗(yàn)1:分組培養(yǎng)2d，通過免疫熒光

2、染色技術(shù)，測(cè)量軸突生長(zhǎng)平均長(zhǎng)度、軸突遠(yuǎn)端平均微管熒光密度，觀察完全性截癱大鼠脊髓提取液是否對(duì)軸突生長(zhǎng)影響（A組，DRGNs+50μlPBS;B組，DRGNs+50μl對(duì)照組大鼠脊髓提取液;C組，DRGNs+50μl假手術(shù)組脊髓提取液;D組，DRGNs+50μl手術(shù)組脊髓提取液）。實(shí)驗(yàn)2:分組培養(yǎng)1d、2d，通過免疫熒光染色技術(shù)，測(cè)量軸突生長(zhǎng)平均長(zhǎng)度、軸突遠(yuǎn)端平均微管熒光密度，觀察在模擬脊髓損傷微環(huán)境下Y27632、Taxol、db-cA

3、MP分別與聯(lián)合應(yīng)用是否對(duì)軸突生長(zhǎng)影響（A組，DRGNs+50μlPBS;B組，DRGNs+50μl完全性截癱大鼠脊髓提取液;C組，DRGNs+50μl完全性截癱大鼠脊髓提取液+30μM Y26732;D組，DRGNs+50μl完全性截癱大鼠脊髓提取液+2nM Taxol;E組，DRGNs+50μl完全性截癱大鼠脊髓提取液+50μMdb-cAMP;F組，DRGNs+50μl完全性截癱大鼠脊髓提取液+30μM Y26732+2nMTaxol

4、+50μM db-cAMP）。
　　結(jié)果：①實(shí)驗(yàn)1:共同培養(yǎng)2d后，軸突生長(zhǎng)平均長(zhǎng)度，A組為142.8±5.4μ m，B組為137.2±3.9μ m，C組為144.3±3.8μ m，D組為47.6±3.3μ m。單因素方差分析示:D組與A、B、C組之間，P＜0.01，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。軸突遠(yuǎn)端平均微管熒光密度，A組為175.3±2.7AFU/μm，B組為195.6±2.3AFU/μm，C組為195.4±2.2AFU/μm，D組為6

5、5.0±1.6AFU/μ m。D組與A、B、C組之間，P＜0.01，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。②實(shí)驗(yàn)2:共同培養(yǎng)1d后，軸突平均長(zhǎng)度，A組為136.9±4.2μ m，B組為47.4±4.1μ m，C組為157.3±5.8μm，D組為135.3±4.7μ m，E組為157.1±4.3μ m，F(xiàn)組為175.9±4.9μm。單因素方差分析示:B組與A、C、D、E和F組之間，P＜0.01，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2d后，軸突平均長(zhǎng)度，A組為142.5±1.9

6、μm，B組為44.3±2.4μ m，C組為165.1±2.8μ m，D組為143.4±3.9μ m，E組為165.3±3.3μ m，F(xiàn)組為190.8±3.1μm。單因素方差分析示:B組與A、C、D、E和F組之間，P＜0.01，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。D組與C、E和F組之間，P＜0.05，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。F組與A、B、C、D和E組之間，P＜0.01，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;A組與D組之間，P＞0.05，兩者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;C組與E組之間，P＞0.05

7、，兩者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。軸突遠(yuǎn)端平均微管熒光密度，A組為180.8±3.4AFU/μm，B組為60.6±2.7AFU/μm，C組為394.6±3.3AFU/μ m，D組為202.1±2.1AFU/μm，E組為364.4±2.8AFU/μ m，F(xiàn)組為475.7±3.4AFU/μm。B組與A、C、D、E和F組之間，P＜0.01，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。F組與A、B、C、D和E組之間，P＜0.01，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;C組與E組之間，P＞0.05，兩者無

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：①完全性截癱大鼠脊髓提取液對(duì)新生SD大鼠DRGNs軸突生長(zhǎng)有抑制作用，通過前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，也表明完全性截癱大鼠脊髓提取液可模擬脊髓損傷的微環(huán)境，抑制新生SD大鼠DRGNs軸突再生;②單獨(dú)應(yīng)用適合劑量的Y27632、Taxol和db-cAMP能促進(jìn)軸突再生，生長(zhǎng)錐形成。聯(lián)合應(yīng)用Y27632，Taxol和db-cAMP對(duì)新生大鼠DRGNs軸突生長(zhǎng)促進(jìn)作用比單一應(yīng)用更為明顯，形成多個(gè)分支、甚至神經(jīng)網(wǎng)，生長(zhǎng)錐更加粗大