db-cAMP和Taxol聯(lián)合應用促進脊髓損傷后新生SD大鼠背根神經節(jié)神經元軸突生長的體外實驗研究.pdf

1、目的：在模擬脊髓損傷微環(huán)境下觀察db-cAMP和Taxol聯(lián)合應用對新生SD大鼠背根神經節(jié)神經元軸突再生的影響。
　　方法：①成年雌性 SD大鼠采用Allen的改良方法制作截癱模型：實驗隨機分組：手術組7只、假手術對照組7只、對照組7只；根據(jù)改良Allen方法制作T9完全性截癱SD大鼠模型，1w后取T8~T10節(jié)段脊髓并分離、過濾形成組織勻漿并制備脊髓提取液；②使用新生SD大鼠并取背根神經節(jié)然后行神經元分離、培養(yǎng)和鑒定；③實驗1：

2、分組培養(yǎng)2d，采用免疫熒光染色技術，并測量軸突生長平均長度和軸突遠端平均微管熒光密度，最后觀察完全性截癱 SD大鼠脊髓提取液對軸突生長是否有影響（A組，50μl手術組脊髓提取液+DRGNs；B組，50μl假手術組脊髓提取液+DRGNs；C組，50μl對照組大鼠脊髓提取液+DRGNs；D組，50μl PBS+DRGNs）。實驗2：分組培養(yǎng)1d、2d，采用免疫熒光染色技術，并測量軸突生長平均長度和軸突遠端平均微管熒光密度，最后觀察在模擬脊髓

3、損傷微環(huán)境下 db-cAMP、Taxol分別與聯(lián)合應用對軸突生長是否會產生影響（A組，50μM db-cAMP+2nM Taxol+50μl完全性截癱大鼠脊髓提取液+DRGNs；B組，50μM db-cAMP+50μl完全性截癱大鼠脊髓提取液+DRGNs；C組，2nM Taxol+50μl完全性截癱大鼠脊髓提取液+DRGNs；D組，50μl完全性截癱大鼠脊髓提取液+DRGNs；E組，50μlPBS+DRGNs）。
　　結果：①實驗

4、1:共同培養(yǎng)2d后，軸突生長平均長度，A組為47.7±3.2μm，B組為144.1±3.7μm，C組為137.1±3.8μm，D組為142.7±5.5μm。單因素方差分析示：A組與B、C、D組之間，P<0.01,有顯著統(tǒng)計學差異。軸突遠端平均微管熒光密度，A組為65.1±1.5AFU/μm，B組為195.2±2.4AFU/μm， C組為195.4±2.5AFU/μm， D組為175.1±2.9AFU/μm。A組與B、C、D組之間，P<0

5、.01,有顯著統(tǒng)計學差異。②實驗2：共同培養(yǎng)1d后，軸突平均長度，A組為168.3±4.7μm，B組為157.2±4.3μm，C組為135.2±4.8μm，D組為47.3±4.2μm，E組為136.8±4.3μm。單因素方差分析示：D組與A、B、C和E組之間，P<0.01,有顯著統(tǒng)計學差異。2d后，軸突平均長度，A組為174.8±3.2μm，B組為165.2±3.4μm， C組為143.5±3.8μm，D組為44.2±2.5μm，E組為

6、142.6±1.8μm。單因素方差分析示：D組與 A、B、C和 E組之間，P<0.01,有顯著統(tǒng)計學差異。C組與A和B組之間，P<0.05,有顯著統(tǒng)計學差異。A組與B、C、D和E組之間，P<0.01,有顯著統(tǒng)計學差異；C組與E組之間，P>0.05,兩者無統(tǒng)計學差異；C組與B組之間，P<0.01,有顯著統(tǒng)計學差異。軸突遠端平均微管熒光密度，A組為384.6±3.2AFU/μm，B組為364.3±2.9AFU/μm，C組為202.1±2.2

7、AFU/μm，D組為60.7±2.8AFU/μm，E組為180.9±3.3AFU/μm。D組與A、B、C、和E組之間，P<0.01,有顯著統(tǒng)計學差異。A組與B、C、D和E組之間，P<0.01,有顯著統(tǒng)計學差異；C組與B組之間，P<0.01,有顯著統(tǒng)計學差異。
　　結論：①完全性截癱大鼠脊髓提取液對新生SD大鼠DRGNs軸突生長有抑制作用，通過前期實驗結果，也表明完全性截癱大鼠脊髓提取液可模擬脊髓損傷的微環(huán)境，抑制新生SD大鼠DRG