薰衣草高效再生體系的創(chuàng)建及農(nóng)桿菌介導(dǎo)透明顫菌血紅蛋白基因（vgb）轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、薰衣草色澤鮮艷、香味濃郁，是主要的天然香料植物之一。由于薰衣草喜光怕澇的特性和精油產(chǎn)量較低的缺點，使薰衣草種植區(qū)域及商業(yè)利用都受到約束。為了能使薰衣草更好的用于化妝品和城市綠化，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改良薰衣草品種將成為一種快捷有效的方法。本研究旨在通過對薰衣草再生體系及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究，將基因vgb導(dǎo)入到薰衣草中，以期提高薰衣草耐澇能力和精油產(chǎn)量，同時為利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改良薰衣草品種的廣泛運用打下基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： 1.

2、建立了薰衣草的再生體系。通過對兩個薰衣草品種成熟葉再生的研究，獲得了“英國薰衣草”和“齒葉雜種薰衣草”以成熟葉為外植體的高頻再生體系。將英國薰衣草和齒葉雜種薰衣草的成熟葉經(jīng)0.1％升汞消毒2min后，葉背面向下分別接種在1/3MS+6-BA1.00mg/L、1/2MS+6-BA1.00mg/L的分化培養(yǎng)基中，三十天后觀察統(tǒng)計，英國薰衣草葉片再生率高達(dá)80.3％，而齒葉雜種薰衣草葉片再生率只達(dá)到70.33％；將兩個品種的薰衣草再生芽叢中長

3、至2cm以上的單芽切下后接種在生根培養(yǎng)基1/2MS+1.0mg/LIAA上后可使再生芽出根快、整齊、根粗壯。結(jié)果表明：薰衣草不同基因型的葉片其再生能力不同；英國薰衣草再生能率明顯高于齒葉雜種薰衣草。 2.成功構(gòu)建了vgb植物表達(dá)載體PGBI4ASVHB構(gòu)建了含有vgb基因的高效植物表達(dá)載體PGBI4ASVHB，采用凍融法成功將該載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌菌株EHA105，為下一步的受體轉(zhuǎn)化工作提供了良好基礎(chǔ)。 3.建立了以“英國薰衣

4、草”成熟葉為受體的轉(zhuǎn)化體系通過對外植體的Cef脫菌濃度、Kan篩選濃度以及影響轉(zhuǎn)化頻率因素的研究，獲得了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的“英國薰衣草”成熟葉轉(zhuǎn)化體系：未經(jīng)預(yù)培養(yǎng)的葉盤在OD600=0.4的根癌農(nóng)桿菌菌液中浸染10min共培養(yǎng)1d；以300mg/LCef為脫菌濃度，30mg/LKan為葉盤分化抗性篩選濃度，10mg/LKan為生根抗性篩選濃度。 4.轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測對轉(zhuǎn)基因植株的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到了與陽性對照vgb(