2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  探討胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-2(insulin-like growth factorbinding protein-2,IGFBP-2)在神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)增殖和分化中的作用及機(jī)制。
  方法:
  1.嗅鞘細(xì)胞條件培養(yǎng)基(olfactory ensheathing cells-conditionedmedium,OCM)和星形膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基(astrocyte

2、s-conditionedmedium,ACM)中IGFBP-2表達(dá)情況分析:取新生1d昆明小鼠,分離培養(yǎng)嗅鞘細(xì)胞(olfactory ensheathing cells,OECs)和星形膠質(zhì)細(xì)胞(Astrocytes,ACs),分別制備無血清OCM和ACM。凝膠電泳、蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析及Western Blot檢測OCM和ACM中IGFBP-2的含量,ELISA法測定IGFBP-2濃度。
  2.IGFBP-2對NSCs增殖的影響:

3、取第3代C17.2,根據(jù)IGFBP-2終濃度的不同分為0 ng/ml組、125 ng/ml組、250 ng/ml組、500 ng/ml組。作用5d后倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況并計數(shù),流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期變化并計算增殖指數(shù),MTT檢測細(xì)胞生長曲線。收集各組細(xì)胞行Western Blot檢測細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原(Ki67、PCNA)表達(dá)情況,檢測總蛋白激酶1/2(total extracellular regulated proteink

4、inases,t-ERK1/2)及活化蛋白激酶1/2(positive extracellular regulated protein kinases,p-ERK1/2)表達(dá)情況;
  3.IGFBP-2誘導(dǎo)NSCs分化:取第3代C17.2,根據(jù)培養(yǎng)基的不同,分為DMEM/F12培養(yǎng)基組和OCM培養(yǎng)基組,并根據(jù)IGFBP-2終濃度的不同分為0 ng/ml組,125 ng/ml組、250 ng/ml組、500 ng/ml組,誘導(dǎo)5d

5、后收集各組細(xì)胞,行Western Blot檢測細(xì)胞巢蛋白(Nestin)、神經(jīng)膠質(zhì)酸性蛋白(GFAP)及β-微管蛋白Ⅲ(TUJ-1)表達(dá)情況,免疫熒光染色法鑒定GFAP,TUJ-1陽性細(xì)胞并計數(shù),流式分析GFAP,TUJ-1陽性細(xì)胞。
  結(jié)果:
  1.OCM和ACM中IGFBP-2表達(dá)情況分析: Western Blot顯不OCM中IGFBP-2蛋白表達(dá)比ACM中高。電泳及質(zhì)譜分析結(jié)果示OCM中IGFBP-2的表達(dá)量約為

6、ACM的2.3倍,ELISA檢測結(jié)果顯不OCM中IGFBP-2濃度為188±48.84 ng/ml,ACM中濃度為49.25±21.14 ng/ml;
  2.IGFBP-2對NSCs增殖的影響:隨著IGFBP-2濃度的遞增,C17.2細(xì)胞數(shù)目及細(xì)胞活力明顯增加,細(xì)胞周期檢測示0 ng/ml組、125 ng/ml組、250 ng/ml組、500 ng/ml組S期細(xì)胞占比分別為(%):7.03±0.59、8.76±0.86、11.1

7、5±0.56、13.10±0.88,各組增殖指數(shù)PI分別為(%):17.62±2.12、19.98±2.04、21.71±1.76、25.48±1.01。Western Blot結(jié)果也證實(shí),隨著IGFBP-2濃度的增加,PCNA,Ki-67的表達(dá)隨之提高;并且發(fā)現(xiàn)C17.2經(jīng)IGFBP-2誘導(dǎo)5 min后,t-ERK1/2的表達(dá)無明顯改變,p-ERK1/2表達(dá)迅速增加。
  3.IGFBP-2誘導(dǎo)NSCs分化:D/F12培養(yǎng)基組:

8、Western Blot、流式分析示各濃度組GFAP、TUJ-1表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義;OCM培養(yǎng)基組:免疫熒光計數(shù)示0 ng/ml組、125 ng/ml組、250 ng/ml組、500 ng/ml組GFAP陽性細(xì)胞數(shù)目分別為(%):6.87±1.34、5.24±6.04、28.14±6.38、2.97±10.03;各組TUJ-1陽性細(xì)胞數(shù)目分別為(%):44.00±6.48、25.24±5.85、20.25±7.59、11.50±4.1

9、3。Western Blot也證實(shí),隨IGFBP-2濃度升高,GFAP表達(dá)逐漸增多,TUJ-1表達(dá)逐漸減少,各濃度組與對照組及各濃度組組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
  結(jié)論:
  1.IGFBP-2具有促進(jìn)C17.2增殖的作用,此作用與IGFBP-2濃度呈正相關(guān),其機(jī)制可能與ERK1/2通路激活有關(guān);
  2.IGFBP-2對C17.2分化無影響;
  3.在OCM誘導(dǎo)條件下,IGFBP-2具有促進(jìn)C17.2向膠質(zhì)細(xì)

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