銀杏葉提取物EGb761改善脂多糖誘導的小鼠抑郁樣行為及其機制研究.pdf

1、目的：
　　本研究通過單次和重復間歇腹腔注射LPS的方法，制備急、慢性抑郁樣行為小鼠模型，通過EGb761預處理和治療，觀察小鼠行為學改變，對比炎性因子、BDNF、氧化應激及皮質酮表達水平干預前后的變化，初步明確EGb761抗抑郁作用，進一步探討該藥的抗抑郁機理，為EGb761應用于抑郁癥的治療提供理論依據。
　　方法：
　　1.動物模型的建立與評估
　　(1)急性抑郁樣行為小鼠模型
　　選用C57BL/6

2、J雄性小鼠，腹腔內單次注射LPS，劑量為830μg/kg，應用強迫游泳實驗、懸尾實驗、蔗糖偏好實驗和曠場實驗評估小鼠抑郁樣行為的形成。
　　(2)慢性抑郁樣行為小鼠模型
　　選用C57BL/6J雌性小鼠，每月相同5天連續(xù)腹腔注射LPS，劑量依次是:750μg/kg、1000μg/kg、1250μg/kg、1000μg/kg、750μg/kg，連續(xù)注射4個月，應用強迫游泳實驗、懸尾實驗、蔗糖偏好實驗評估小鼠抑郁樣行為的形成。<

3、br>　　2.實驗分組與實驗過程
　　(1) EGb761預處理對急性抑郁樣行為小鼠行為學的影響與機制
　　40只C57BL/6J雄性小鼠隨機分為對照組、模型組、EGb761低劑量組、EGb761中劑量組和EGb761高劑量組，每組8只。從實驗第1天至12天，EGb761低、中、高劑量組小鼠分別給予EGb76150 mg/kg/day、100 mg/kg/day和150mg/kg/day（生理鹽水溶解）灌胃，對照組和模型組小

4、鼠給予等量生理鹽水;經過10天預處理，模型組、EGb761低、中、高劑量組小鼠均腹膜內注射LPS，劑量為830μg/kg，小鼠腹腔注射LPS24h后，采用曠場試驗評估EGb761對小鼠的自發(fā)活動的影響，采用強迫游泳實驗、懸尾實驗和蔗糖偏好實驗評價EGb761對小鼠抑郁樣行為的影響。
　　行為學評價完成后，小鼠麻醉處死，取大腦組織，在冰上剝離出海馬，用勻漿器制成勻漿，4℃、5000 rpm離心15 min，上清液分裝后，-20℃保存

5、。ELISA測定小鼠海馬組織炎性細胞因子和BDNF水平。
　　(2) EGb761治療對慢性抑郁樣行為小鼠行為學的影響與機制
　　40只C57BL/6J雌性小鼠隨機分為對照組、模型組、EGb761低劑量組、EGb761中劑量組和EGb761高劑量組，每組8只;模型組、EGb761低、中、高劑量組小鼠每月相同5天連續(xù)腹腔注射LPS，劑量依次是:750μg/kg、1000μg/kg、1250μg/kg、1000μg/kg、750

6、μg/kg，對照組腹腔注射等量生理鹽水，連續(xù)注射4個月;造模完成后，EGb761低、中、高劑量組分別給予EGb76150 mg/kg/day、100 mg/kg/day和150 mg/kg/day（生理鹽水溶解）灌胃1個月，對照組和模型組小鼠給予等量生理鹽水。采用強迫游泳實驗、懸尾實驗和蔗糖偏好實驗評價EGb761對小鼠慢性抑郁樣行為的影響。
　　行為學評價完成后，小鼠麻醉處死，取血靜置后，4℃、3000 rpm離心5min，取上

7、清，-20℃保存。取大腦組織，在冰上剝離出海馬，用勻漿器制成勻漿，4℃、5000 rpm離心15 min，上清液分裝后，-20℃保存。
　　結果：
　　1.LPS誘導急性和慢性炎癥致小鼠抑郁樣行為
　　與對照組相比，腹腔注射LPS可使小鼠FST和TST表現(xiàn)出明顯延長的不動時間(P＜0.05)，而且小鼠蔗糖水偏嗜度顯著降低(P＜0.05)，這說明單次和重復間歇腹腔注射LPS皆可誘導小鼠顯著的抑郁樣行為;在曠場實驗中，急性

8、抑郁模型組小鼠的水平得分和垂直得分均較對照組減少(P＜0.05)，這表明腹腔注射LPS可減少小鼠的自發(fā)活動。
　　2.EGb761預處理對急性抑郁樣行為小鼠的影響
　　(1)改善急性抑郁樣行為
　　與模型組相比，EGb761中劑量組和高劑量組小鼠FST和TST的不動時間明顯縮短(P＜0.05)，而且，EGb761高劑量組小鼠的不動時間短于EGb761低劑量組和中劑量組(P＜0.05)。
　　蔗糖偏嗜實驗中，EGb

9、761中劑量組和高劑量組小鼠的蔗糖水偏嗜度要高于的模型組(P＜0.05)，EGb761高劑量組小鼠的蔗糖水偏嗜度要高于EGb761低劑量組（P＜0.05）;以上結果表明，EGb761預處理對單次腹腔注射LPS誘導的抑郁樣行為小鼠有抗抑郁作用，并且其作用呈劑量相關性。
　　在曠場實驗中，模型組、EGb761高劑量組、中劑量組和低劑量組之間小鼠的水平得分和垂直得分無顯著差別(P＞0.05)，這提示EGb761預處理對小鼠的自發(fā)活動沒有

10、顯著影響。
　　(2)調節(jié)海馬炎癥細胞因子的產生
　　與對照組相比，模型組小鼠海馬促炎性細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17A的濃度更高(P＜0.05)，而海馬抗炎性細胞因子IL-10的濃度低于對照組（P＜0.05），這表明腹腔注射LPS可誘導小鼠海馬的炎癥。然而，與模型組相比，預先給予中劑量和高劑量EGb761均顯著抑制海馬TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17A水平的升高，同時升高IL-10的水平（

11、P＜0.05）;此外，高劑量EGb761的抗炎作用要強于EGb761低劑量和中劑量（P＜0.05）。
　　(3)增加海馬BDNF的水平
　　與對照組相比，模型組小鼠海馬BDNF的濃度低于對照組(P＜0.05)，然而，與模型組相比，預先給予中劑量和高劑量EGb761均顯著升高海馬BDNF的水平（P＜0.05）;此外，高劑量EGb761的作用要強于EGb761低劑量和中劑量(P＜0.05)。
　　3.EGb761治療對慢性

12、抑郁樣行為小鼠的影響
　　(1)改善慢性抑郁樣行為
　　與模型組相比，EGb761中劑量組和高劑量組小鼠FST和TST的不動時間明顯縮短(P＜0.05)，而且，EGb761高劑量組小鼠的不動時間短于EGb761低劑量組和中劑量組(P＜0.05)。
　　蔗糖偏嗜實驗中，EGb761中劑量組和高劑量組小鼠的蔗糖水偏嗜度要高于的模型組（P＜0.05），EGb761高劑量組小鼠的蔗糖水偏嗜度要高于EGb761低劑量組(P＜0.

13、05);以上結果表明，EGb761治療對重復間歇腹腔注射LPS誘導的慢性抑郁樣小鼠有抗抑郁作用，并且其作用呈劑量相關性。
　　(2)調節(jié)海馬和血清炎癥細胞因子的產生
　　在小鼠海馬，與對照組相比，模型組小鼠促炎性細胞因子TNF-α和IL-6的濃度更高（P＜0.05），而海馬抗炎性細胞因子IL-10的濃度低于對照組(P＜0.05)，這表明連續(xù)4個月重復、間歇LPS腹腔注射也可誘導小鼠海馬的炎癥。EGb761給藥1個月后，與模型

14、組相比，EGb761中劑量和高劑量組均顯著抑制海馬TNF-α和IL-6水平的升高以及IL-10水平的降低(P＜0.05)。此外，高劑量EGb761的抗炎作用要強于EGb761低劑量和中劑量（P＜0.05）。
　　(3)降低海馬和血清氧化應激水平
　　與對照組相比，連續(xù)4個月重復、間歇LPS腹腔注射可顯著升高模型組小鼠海馬和血清的MDA含量（P＜0.05），同時，海馬和血清SOD、CAT和GSH-Px的活性下降（P＜0.05）

15、。EGb761給藥1個月后，低劑量組、中劑量組和高劑量組小鼠海馬和血清的MDA含量均降低，與模型組相比差異顯著(P＜0.05)。此外，給予EGb761高劑量和中劑量治療，可恢復小鼠海馬和血清SOD、CAT和GSH-Px的活性，與模型組相比差異顯著(P＜0.05)，并且EGb761高劑量的作用更強（P＜0.05）。
　　(4)降低血清CORT的濃度
　　與對照組相比，連續(xù)4個月重復、間歇LPS腹腔注射可顯著升高模型組小鼠血清C

16、ORT的濃度（P＜0.05）。EGb761給藥1個月后，中劑量組和高劑量組小鼠血清CORT的濃度均降低，與模型組相比差異顯著(P＜0.05)，此外，EGb761高劑量抑制小鼠血清CORT的作用更強(P＜0.05)。
　　結論：
　　1.單次和重復間歇腹腔注射LPS均可誘導C57BL/6J小鼠顯著的抑郁樣行為，重復間隔LPS給藥誘導的抑郁樣行為持續(xù)時間更長。
　　2.EGb761預處理可顯著減輕單次腹腔注射LPS小鼠的急

17、性抑郁樣行為，并且其作用呈劑量相關性;同時，EGb761預處理可抑制小鼠海馬促炎性細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17A的產生，并能恢復小鼠海馬BDNF和抗炎性細胞因子IL-10的水平;EGb761抗抑郁作用與其抑制海馬的炎癥相關。
　　3.EGb761治療可減輕重復間歇腹腔注射LPS小鼠的慢性抑郁樣行為，并且其作用呈劑量相關性;同時，EGb761治療可抑制小鼠海馬TNF-α，IL-6以及海馬和血清MDA的產生，恢