microRNAlet-7a與抑郁癥臨床及機(jī)制的初步研究.pdf

1、研究背景：
　　抑郁癥是臨床最常見的精神疾病之一，具有發(fā)病率高、致殘率高、致死率高等特點(diǎn)。目前關(guān)于抑郁癥發(fā)病機(jī)制的學(xué)說復(fù)雜多樣，主要有單胺類神經(jīng)遞質(zhì)（5-HT、DA、NE）假說、細(xì)胞因子假說、下丘腦-垂體-腎上腺軸假說、神經(jīng)營養(yǎng)因子假說等，其中大量研究提示抑郁癥患者5-HT系統(tǒng)功能紊亂是抑郁癥發(fā)病的重要機(jī)制之一。5-HT受體作為5-HT系統(tǒng)的重要組成部分，由于其在海馬中廣泛分布，因此被視為是抗抑郁治療的主要靶點(diǎn)。5-HT受體共有7

2、種亞型，其中5-HT1A和5-HT4受體是目前被認(rèn)為與抑郁癥關(guān)系最為密切的兩個(gè)受體，并逐漸受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛重視。
　　前期基于miRNA雜交芯片技術(shù)，我們研究小組構(gòu)建了抑郁癥患者血漿的差異 miRNA表達(dá)譜，其中發(fā)現(xiàn)異常表達(dá)的 microRNA let-7（microRNA let-7a和 microRNA let-7f）。根據(jù) miRNA數(shù)據(jù)庫提示，microRNA-let7預(yù)測能夠靶向調(diào)節(jié)5-HT受體的表達(dá)，但是兩者間的具

3、體關(guān)系并未得到證實(shí)。因此我們選擇microRNA let-7a為切入點(diǎn)，在研究 microRNA let-7a與抑郁癥關(guān)系的同時(shí)，初步探索 microRNA let-7a的致病機(jī)制。
　　研究目的：
　　1.采用實(shí)時(shí)定量 PCR技術(shù)檢測抑郁癥患者血漿 microRNA let-7a和microRNA let-7f的表達(dá)水平，評估m(xù)icroRNA let-7a與抑郁癥的關(guān)系。
　　2.采用meta薈萃分析方式評估抑郁癥患

4、者腦組織5-HT1A受體的改變情況，進(jìn)一步明確5-HT受體改變與抑郁癥的關(guān)系。
　　3.構(gòu)建CUMS大鼠抑郁模型，檢測microRNA let-7a在海馬中的表達(dá)水平；采用 RNAi和雙熒光素基因檢測技術(shù)，初步探討 microRNA let-7a可能的致病機(jī)制。
　　研究方法：
　　本研究分為三部分。第一部分，基于實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測抑郁癥患者血漿microRNA let-7（microRNA let-7a和micr

5、oRNA let-7f）的表達(dá)情況；第二部分，采用meta薈萃分析5-HT1A受體在抑郁癥患者腦組織區(qū)域的表達(dá)情況；第三部分，構(gòu)建CUMS大鼠抑郁模，檢測大鼠腦組織microRNA let-7a的表達(dá)，采用RNAi技術(shù)研究microRNA let-7a與抑郁癥發(fā)病關(guān)系及其通過調(diào)控下游靶基因作為抑郁癥的潛在致病機(jī)制。
　　主要方法如下：
　　1.運(yùn)用實(shí)時(shí)定量 PCR方法，評估血漿 microRNA let-7a和microRN

6、A let-7f在重型抑郁癥（首發(fā)未用藥，n=60）及正常對照（n=40）血漿中的表達(dá)水平，評估兩種miRNA的診斷價(jià)值。
　　2.通過計(jì)算機(jī)檢索發(fā)表在PubMed、Cochrane librar、Science Direct和Scopus英文數(shù)據(jù)庫以及萬方數(shù)字化期刊全文庫、中國期刊全文數(shù)據(jù)（CNKI）中文數(shù)據(jù)庫的文獻(xiàn)。檢索關(guān)鍵詞設(shè)為“抑郁癥”、“depression”、“depressive episode”、“5-羥色胺受體”

7、、“Serotonin 1A”、“5-HT1A”、“影像學(xué)”、“PET”、“SPECT”、“molecular imaging”。篩選出符合研究標(biāo)準(zhǔn)的文章進(jìn)行meta薈萃分析和meta回歸分析。3. 構(gòu)建慢性不可預(yù)見溫和刺激大鼠抑郁模型，驗(yàn)證慢性應(yīng)激對大腦海馬區(qū)miRNA-let7a的表達(dá)影響。最后通過RNAi技術(shù)構(gòu)建microRNA let-7a過表達(dá)慢病毒質(zhì)粒，進(jìn)一步研究microRNA let7-a作為抑郁癥潛在標(biāo)志物的可能作用機(jī)

8、制。
　　研究結(jié)果：
　　1. 通過實(shí)時(shí)定量 PCR 分析，發(fā)現(xiàn)重型抑郁癥組血漿 microRNA let-7a的表達(dá)水平明顯高于對照組，而microRNA let-7f的表達(dá)在兩組間無明顯差異。通過性別比較分析，女性抑郁癥患者血漿中 microRNA let-7a的表達(dá)水平顯著高于男性抑郁癥患者，而microRNA let-7f的表達(dá)水平在男性和女性患者兩組之間無差異。
　　2. Meta分析研究最后共納入11篇文獻(xiàn)

9、共231例抑郁癥患者和281例健康對照，平均每項(xiàng)研究22例患者和26例健康對照。Meta分析結(jié)果提示抑郁癥患者近顳葉皮質(zhì)區(qū) 5-HT1A 受體表達(dá)水平顯著降低，在中縫核、島葉、前扣帶回以及枕葉 5-HT1A 受體的表達(dá)呈減少趨勢。通過meta薈萃分析證實(shí)抑郁癥患者腦組織區(qū)域5-HT1A受體的表達(dá)量顯著減少。
　　3. 動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，CUMS模型大鼠海馬區(qū)域microRNA let-7a的表達(dá)水平上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。搜庫檢

10、索microRNA let-7a預(yù)測調(diào)控下游靶基因3609個(gè)；雙熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果提示microRNAlet-7a可直接調(diào)控5-HT4基因的表達(dá)。然后構(gòu)建了microRNA let-7a慢病毒質(zhì)粒，并成功轉(zhuǎn)染原代海馬神經(jīng)元。Westerning Blotting檢測發(fā)現(xiàn)microRNA let-7a的過表達(dá)可以使5-HT4和EphA4的表達(dá)下調(diào)，這可能是microRNA let-7a參與抑郁癥病理生理過程的潛在機(jī)制。
　　結(jié)論：