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1、研究目的:本實(shí)驗(yàn)以誘發(fā)皮下腫瘤小鼠為研究對(duì)象,通過(guò)有氧運(yùn)動(dòng)及雷氏蛛毒輸注的方法進(jìn)行干預(yù),觀察有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合雷氏蛛毒干預(yù)對(duì)小鼠皮下誘發(fā)肝腫瘤的干預(yù)作用,探討腫瘤的增殖和凋亡過(guò)程中可能起到的作用及分子機(jī)制。
研究方法:110只雄性KM小鼠,以皮下移植法構(gòu)建H22小鼠肝腫瘤模型。建模成功小鼠隨機(jī)分為5組:0.5ug/g,1ug/g、2ug/g、4ug/g和8ug/g組,每組10只。建模成功小鼠,每隔一天尾靜給藥1次,連續(xù)20天。一般行
2、為學(xué)和腫瘤體積變化觀察,繪制蛛毒藥效曲線并進(jìn)行最優(yōu)劑量的篩選。隨后以相同建模建模方法,構(gòu)建模型對(duì)照組,雷氏蛛毒低劑量、中劑量、高劑量組、有氧運(yùn)動(dòng)組及有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合雷氏蛛毒干預(yù)組,每組10只,每四天測(cè)量1次腫瘤體積。每隔一天尾靜脈注射雷氏蛛毒1次,連續(xù)給藥20天。模型對(duì)組、雷氏蛛毒低劑量、中劑量、高劑量組,停藥后第二天,禁食過(guò)夜進(jìn)行全血及組織取材。有氧游泳運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練與有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合雷氏蛛毒干預(yù)組,5周后所有小鼠禁食過(guò)夜進(jìn)行全血及組織取材。計(jì)算抑
3、瘤率;HE染色法觀察H22腫瘤細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化;免疫組化技術(shù)檢測(cè)H22腫瘤組織中PI3K、Akt、mTOR蛋白水平的差異表達(dá);實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)H22腫瘤組織中PTEN、mTOR、Bcl-2、Bax基因的mRNA表達(dá)水平。
研究結(jié)果:腫瘤體積變化顯示,模型對(duì)照組腫瘤體積生長(zhǎng)速度最快,有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合雷氏蛛毒組腫瘤體積生長(zhǎng)速度最慢。抑瘤率結(jié)果顯示,有氧運(yùn)動(dòng)組腫瘤抑制率明顯高于其他組。HE染色結(jié)果顯示,模型對(duì)照組小鼠腫瘤組織排列較
4、密集,雷氏蛛毒低劑量組腫瘤組織排列欠規(guī)則并出現(xiàn)較小壞死區(qū),雷氏蛛毒中劑量組組織內(nèi)部出現(xiàn)大片壞死區(qū),雷氏蛛毒高劑量組腫瘤組織內(nèi)部可見(jiàn)明顯壞死區(qū),有氧運(yùn)動(dòng)組小鼠腫瘤組織排列疏松、不規(guī)則,有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合雷氏蛛毒干預(yù)組小鼠腫瘤組織內(nèi)部可見(jiàn)較大壞死區(qū)。免疫組化檢測(cè)顯示:有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合雷氏蛛毒干預(yù)組PI3K、Akt、mTOR陽(yáng)性表達(dá)最低,模型對(duì)照組PI3K、Akt、mTOR陽(yáng)性表達(dá)最高。Real-timePCR檢測(cè)顯示:雷氏蛛毒低劑量、中劑量、高劑量、
5、有氧運(yùn)動(dòng)和有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合雷氏蛛毒干預(yù)組,腫瘤PTEN、BaxmRNA表達(dá)水平顯著高于模型對(duì)照組(P<0.01),而B(niǎo)cl-2、mTORmRNA表達(dá)較模型對(duì)照組低(P<0.01);與其他組相比,有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合雷氏蛛毒干預(yù)組PTEN、BaxmRNA表達(dá)水平最高,Bcl-2、mTORmRNA表達(dá)較其他組最低。
結(jié)論:雷氏蛛毒低劑量、中劑量、高劑量組、有氧運(yùn)動(dòng)組及有氧運(yùn)動(dòng)聯(lián)合雷氏蛛毒干預(yù)組,對(duì)小鼠H22肝癌細(xì)胞株誘發(fā)的皮下肝腫瘤有明顯的抑
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