靶向SIRT1的小干擾RNA抑制宮頸癌C33A細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過在細(xì)胞水平研究SIRT1對(duì)宮頸癌C33A細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡的影響及其SIRT1與Notch信號(hào)通路相關(guān)蛋白的關(guān)系，探討SIRTl在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法：以化學(xué)合成的靶向SIRT1基因的小干擾RNA（siRNA）轉(zhuǎn)染C33A細(xì)胞，并分為四組：SIRT1-siRNA組、SIRT1陰性對(duì)照組、Lipofectamine?RNAi MAX組和空白細(xì)胞對(duì)照組。轉(zhuǎn)染細(xì)胞72h后，分別提取各組細(xì)胞總RNA和蛋

2、白，RT-PCR檢測(cè)C33A細(xì)胞SIRT1 mRNA的表達(dá)，免疫印跡法檢測(cè)C33A細(xì)胞中SIRT1、Notch1及Hes1等目的蛋白的表達(dá)，CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖，分別應(yīng)用Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)及Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)C33A細(xì)胞的遷移及侵襲能力，流式AnnexinV-PE雙染法及Hoechst33258細(xì)胞核熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：RT-PCR結(jié)果表明：與空白細(xì)胞對(duì)照組及RNAi MAX組相比，

3、SIRT1-siRNA組細(xì)胞SIRT1 mRNA表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.05)。Western blot結(jié)果顯示：與空白細(xì)胞對(duì)照組、SIRT1陰性對(duì)照組、RNAi MAX組相比，SIRT1-siRNA組細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)量明顯下調(diào)(P＜0.05)，Notch1和 Hes1蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)。CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：SIRT1-siRNA組細(xì)胞增殖抑制率為53.1％，SIRT1陰性對(duì)照組細(xì)胞增殖抑制率為35.4％

4、，RNAi MAX組細(xì)胞增殖抑制率11.5％，SIRT1-siRNA組細(xì)胞增殖抑制率明顯高于其他組。細(xì)胞遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與SIRT1陰性對(duì)照組、RNAi MAX組和空白細(xì)胞對(duì)照組相比，SIRT1-siRNA組穿過人工基底膜細(xì)胞數(shù)明顯減少(P<0.05)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明：與 SIRT1陰性對(duì)照組、RNAi MAX組和空白細(xì)胞對(duì)照組相比，SIRT1-siRNA組C33A細(xì)胞早期凋亡率明顯增高(P<0.05)。Hoechst332