RNA干擾HIF-1α影響宮頸癌HeLa細(xì)胞上皮細(xì)胞—間質(zhì)變的研究.pdf

1、目的：通過RNA干擾技術(shù)沉默人宮頸癌HeLa細(xì)胞乏氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)的表達(dá)，在細(xì)胞水平研究HIF-1α對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞上皮細(xì)胞－間質(zhì)變標(biāo)記蛋白(E-cadherin、N-cadherin、vimentin)表達(dá)的影響。
　　 方法：將人宮頸癌HeLa細(xì)胞株(記為H0細(xì)胞)、轉(zhuǎn)染pGenesil-1空白質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞株(記為H1細(xì)胞)及轉(zhuǎn)染HIF-1α-

2、shRNA質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞株(記為H2細(xì)胞)分別行常氧及乏氧(150μmol/LCoCl2培養(yǎng)12小時(shí))培養(yǎng)，應(yīng)用Western blotting、免疫組織化學(xué)法檢測(cè)每組HeLa細(xì)胞中HIF-1α、上皮標(biāo)記蛋白E-cadherin、間質(zhì)標(biāo)記蛋白vimentin、N-cadherin的表達(dá)情況。組間比較采用方差齊性分析及t檢驗(yàn)，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：1、Western blotting分析顯示，H0細(xì)胞乏氧

3、組HIF-1α、E-cadherin、vimentin及N-cadherin的平均光密度分別為1.182±0.251、0.409±0.112、3.187±0.523、1.638±0.417；H1細(xì)胞乏氧組HIF-1α、E-cadherin、vimentin及N-cadherin的平均光密度分別為1.364±0.279、0.441±0.126、3.276.±0.601、1.437±0.279；H2細(xì)胞乏氧組HIF-1α、E-cadheri

4、n、vimentin及N-cadherin的平均光密度分別為0.248±0.053、0.833±0.257、0.992±0.270、1.004±0.236。2、免疫組織化學(xué)顯示H0細(xì)胞、H1細(xì)胞在乏氧時(shí)HIF-1α、N-cadherin、vimentin蛋白高表達(dá)，而E-cadherin低表達(dá)，H2細(xì)胞在乏氧時(shí)HIF-1α、N-cadherin、vimentin蛋白表達(dá)顯著減弱，而E-cadherin高表達(dá)。3、H2細(xì)胞乏氧組與H0細(xì)胞