上調(diào)miR-143對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、背景與目的:
　　宮頸癌的發(fā)病率占婦科惡性腫瘤的第一位。宮頸癌的病因尚未完全闡明，已經(jīng)明確的是與致癌性的人乳頭瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)感染密切相關(guān)。但并不是所有感染HPV者都會(huì)發(fā)生癌變。宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程，涉及多種與細(xì)胞的生物學(xué)過(guò)程有關(guān)的基因結(jié)構(gòu)與表達(dá)的異常。人們?cè)谘芯繉m頸癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制時(shí)，發(fā)現(xiàn)微小RNA(microRNA)分子表達(dá)失調(diào)與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。
　　micr

2、oRNA(簡(jiǎn)稱(chēng)miRNA或miR)是一類(lèi)長(zhǎng)度約20～25個(gè)核苷酸，進(jìn)化保守的，具有調(diào)控功能的單鏈非編碼RNA分子。成熟的miRNA參與細(xì)胞的增殖、分化、發(fā)育和凋亡過(guò)程。這些小分子RNA的作用類(lèi)似于癌基因或抑癌基因。例如，miR-15a/16-1在慢性淋巴細(xì)胞白血病中群集缺失或下調(diào);miRNAlet-7在肺癌和乳腺癌中下調(diào);miR-17在肺癌中表達(dá)水平上調(diào)。Wang等發(fā)現(xiàn)，miR-126、miR-143、miR-154在宮頸癌中表達(dá)水平下

3、降，而miR-15b、miR-16、miR-146a、miR-155在宮頸癌中的表達(dá)水平升高。miRNA-143在結(jié)直腸癌中表達(dá)異常，上調(diào)結(jié)腸癌細(xì)胞miR-143的表達(dá)水平，能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)凋亡。miR-143在宮頸癌中的研究不多，我們之前的研究顯示miR-143在宮頸癌組織中呈低表達(dá)水平，其表達(dá)水平與組織病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。本研究采用細(xì)胞培養(yǎng)的方法，將miRNA-143轉(zhuǎn)染進(jìn)宮頸癌HeLa細(xì)胞，運(yùn)用熒光定量PCR技術(shù)檢

4、測(cè)轉(zhuǎn)染前后miR-143在宮頸癌HeLa細(xì)胞中的表達(dá)水平，MTT的方法分析細(xì)胞體外增殖情況。我們旨在探索miRNA-143的過(guò)表達(dá)是否對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖產(chǎn)生影響，研究miR-143在宮頸癌發(fā)病機(jī)制中的作用。我們的研究為這些miRNA在宮頸癌的基因診斷及分子生物學(xué)治療方面的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　材料與方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)分組
　　設(shè)置兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組，依據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)情況轉(zhuǎn)染兩個(gè)濃度的miR-143mimics。實(shí)驗(yàn)A

5、組轉(zhuǎn)染miR-143mimics終濃度為10nmol/L(nM);實(shí)驗(yàn)B組轉(zhuǎn)染miR-143mimics的終濃度為20nmol/L（nM）。共設(shè)置三個(gè)對(duì)照組，轉(zhuǎn)染試劑組對(duì)照組加入轉(zhuǎn)染試劑、培養(yǎng)基、和HeLa細(xì)胞;空白對(duì)照組只含有培養(yǎng)基和HeLa細(xì)胞;陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)人工合成的miR-143陰性對(duì)照10nmol/L(nM)。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法
　　選取宮頸腺癌HeLa細(xì)胞系，按以上分組情況采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法將人工合成的miR-14

6、3模擬體(miR-143mimics)轉(zhuǎn)染進(jìn)宮頸癌HeLa細(xì)胞，體外上調(diào)HeLa細(xì)胞中miR-143的表達(dá)水平。用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中miR-143的表達(dá)情況;四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的增殖活性，探討miR-143對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞增影殖的響。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包經(jīng)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，數(shù)值變量資料以(x)±s表示，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組樣本細(xì)胞增殖率比較采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析，兩組間

7、差異比較采用LSD法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.轉(zhuǎn)染后與空白對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)A組(轉(zhuǎn)染10nMmiR-143mimics)與實(shí)驗(yàn)B組(轉(zhuǎn)染20nMmiR-143mimics)miR-143相對(duì)表達(dá)量分別為7.38和13.71，各組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與轉(zhuǎn)染試劑對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)A組與實(shí)驗(yàn)B組miR-143的相對(duì)表達(dá)量分別為4.23和7.86，各組間差異具有統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)意義(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)B組與實(shí)驗(yàn)A組相比，實(shí)驗(yàn)B組miR-143相對(duì)表達(dá)量明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.與三對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)A組（轉(zhuǎn)染10nMmiR-143mimics）與實(shí)驗(yàn)B組（轉(zhuǎn)染20nMmiR-143mimics）HeLa細(xì)胞的增值率下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);細(xì)胞增殖率從轉(zhuǎn)染后24h開(kāi)始下降，48h后HeLa細(xì)胞增殖率明顯下降。實(shí)驗(yàn)B組與實(shí)驗(yàn)A組相比，實(shí)驗(yàn)B組HeLa細(xì)胞增殖率

9、下降更明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.miR-143mimics轉(zhuǎn)染宮頸癌HeLa細(xì)胞能夠有效的提高miR-143在宮頸癌HeLa細(xì)胞中的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)A組與實(shí)驗(yàn)B組轉(zhuǎn)染miR-143mimics后，HeLa細(xì)胞中miR-143的表達(dá)水平隨著轉(zhuǎn)染濃度的增加而上升。
　　2.上調(diào)miR-143在宮頸癌HeLa細(xì)胞中的表達(dá)水平后，HeLa細(xì)胞增殖明顯受到抑制，且受抑制程度與轉(zhuǎn)染濃度呈劑量效應(yīng)