shRNA下調(diào)MMP-9對MCAO大鼠腦保護作用的DTI研究.pdf

1、背景和目的:
　　缺血性腦損傷已經(jīng)成為人類腦血管疾病的最常見類型之一，并且腦梗死后的一些常見并發(fā)癥嚴重損害著人類的健康。其中，腦水腫做為腦梗死后的重要并發(fā)癥之一，對腦梗死的發(fā)生發(fā)展起著很重要的作用。然而，基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）則與腦水腫、血腦屏障通透性緊密相關(guān)。本研究預(yù)通過對大鼠大腦中動脈栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型腦缺血區(qū)組織的DTI成像評價，從而來探討腦梗死后

2、水腫區(qū)的面積及FA值與MMP-9基因表達的相關(guān)性，并進一步探討慢病毒介導(dǎo)的shRNA下調(diào)MMP-9基因的表達，減輕急性腦梗死后腦水腫的面積，從而保護大鼠的神經(jīng)功能，以及改善其影像學(xué)表現(xiàn)。
　　材料與方法:
　　1、將體重為260g至300g的32只健康雄性SD大鼠，隨機分為以下四組（每組8只）：A組（假手術(shù)組）：用鑷子分離頸外動脈分支，并把該分支結(jié)扎，暴露頸內(nèi)頸外動脈分叉，在分叉處視野下前進0.5 cm后固定線拴，并未真正插

3、入大鼠頸內(nèi)動脈顱內(nèi)段；B組（MCAO組）：單籠飼養(yǎng)MCAO模型成功后的大鼠；C組（生理鹽水組）：制作MCAO模型兩周前，向大鼠右側(cè)腦室注射生理鹽水5μl；D組（慢病毒干預(yù)組）：制作MCAO兩周前，向大鼠右側(cè)腦室注射慢病毒介導(dǎo)的shRNA5μl。在造模成功后4h、8h、12h、18h、24h時間點，本研究的各組大鼠均進行了神經(jīng)功能評分（mNSS）和磁共振掃描，采用的是美國GE Discovery MR7503.0T超導(dǎo)高場磁共振掃描機進行

4、批量掃描，使用上海晨光公司生產(chǎn)的大鼠專用線圈，用棉塞固定大鼠頭部使其呈仰臥位，保持頭先進，掃描中心定位在大鼠視交叉，常規(guī)掃描軸位T1WI、T2WI、T2WI FLAIR、DWI、DTI等序列。計算病灶側(cè)的ADC值和FA值。
　　2、另取32只實驗動物（每組8只），在對應(yīng)于MRI檢查時間點取大鼠缺血側(cè)腦組織，Western blot測定缺血側(cè)腦組織MMP-9蛋白表達；
　　3、另外再取32只實驗動物（每組8只），在對應(yīng)于MRI

5、檢查時間點取缺血側(cè)腦組織，行石蠟切片，進行免疫組化染色，觀測MMP-9蛋白的表達；
　　4、通過SPSS17.0軟件對本實驗中的所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，采用-x±s記錄計數(shù)資料。檢驗方法為t檢驗，重復(fù)測量方差分析，Pearson相關(guān)分析，檢驗水準(zhǔn)為α=0.05，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、在缺血后4h、8h、12h、18h、24h時，慢病毒干預(yù)組的mNSS評分較MCAO模型組降低，差異具有統(tǒng)

6、計學(xué)意義(p<0.05)
　　2、在缺血后4h、8h、12h、18h、24h時，慢病毒干預(yù)組缺血區(qū)的ADC值、FA值較MCAO模型組升高，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義。兩組間的ADC值、FA值在4h、8h、12h、18h、24h時間點差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)
　　3、局灶性腦缺血后MMP-9蛋白表達逐漸增多；慢病毒干預(yù)組相應(yīng)時間點的MMP-9蛋白的表達較MCAO模型組有所降低，且在相應(yīng)的每個時間點差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<

7、0.05)
　　4、各手術(shù)組大鼠的mNSS神經(jīng)功能評分與缺血性腦梗死核心區(qū)的FA值、MMP-9蛋白表達存在負相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1、腦梗死區(qū)腦組織MMP-9表達上調(diào)參與大鼠腦梗死周圍水腫的形成以及神經(jīng)功能損傷的發(fā)生。
　　2、慢病毒介導(dǎo)的shRNA通過抑制MMP-9基因的表達，減輕血管源性水腫，發(fā)揮腦梗死后的保護作用。
　　3、磁共振DTI可以動態(tài)監(jiān)測缺血性腦梗死大鼠缺血區(qū)的改變及其注射病毒進行基因抑制