血必凈對膿毒癥大鼠體內(nèi)MMP-9水平的影響及其肺臟的保護作用.pdf

1、目的：膿毒癥(sepsis)是感染源引起的不可控制的全身炎癥反應(yīng)綜合癥(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)。目前研究表明：膿毒癥是引起急性肺損傷(acute lung injury，ALI)/急性呼吸窘迫綜合癥(acute respiratory distress syndrome，ARDS)的常見的病因，膿毒癥及并發(fā)的多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfu

2、nction syndrome，MODS)，救治棘手、死亡率高，可達(dá)70％?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是一種鋅依賴性蛋白水解酶，主要由中性粒細(xì)胞，單核/巨噬細(xì)胞以及嗜酸性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞產(chǎn)生，被激活后可降解基底膜，導(dǎo)致白細(xì)胞的滲出，促進炎癥反應(yīng)，引起組織水腫等。血必凈注射液是具有對抗細(xì)菌毒素、降低內(nèi)毒素水平、調(diào)節(jié)免疫及炎性介質(zhì)、改善微循環(huán)、保護血管內(nèi)皮細(xì)胞的有效藥物。大量的動物實驗以及

3、部分臨床試驗均初步肯定血必凈注射液在聯(lián)合治療危重病人全身炎癥反應(yīng)甚至膿毒癥的療效。本研究旨在通過對膿毒癥大鼠血清中MMP-9濃度的影響并結(jié)合肺臟形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的變化，探討血必凈注射液對肺臟的保護作用及其作用機制。 方法：選用雄性Sprague-Dawley大鼠36只，體重在250-300g之間，分為3組。空白組(Sham group)、氯化鈉組(NS group)、血必凈組(X group)，每組動物12只。CLP法制作膿毒癥

4、模型，并行頸動脈插管以備采血。空白組只開腹，牽拉盲腸但不結(jié)扎，術(shù)后尾靜脈注射生理氯化鈉4mL/kg；NS組行CLP，之后也經(jīng)尾靜脈注射生理氯化鈉4mL/kg；X組行CLP后尾靜脈注射血必凈注射液4mL/kg(生藥濃度為500g/1)。術(shù)后6h，頸動脈采血2mL，離心后取上清，-80℃保存，ELISA檢測MMP-9水平。處死動物后，開胸取右肺中葉，吸干表面水分，去除支氣管后稱濕重，再置于85℃烤箱中24小時，稱干重，計算肺濕/干重比(W/

5、D)。按操作要求迅速剪取右肺下葉，HE染色法光鏡觀察肺臟形態(tài)學(xué)改變，透射電鏡觀察肺臟血管內(nèi)皮的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：1 CLP術(shù)后一般情況觀察：空白組大鼠麻醉清醒后活動基本如常，剖腹未見惡臭、腹腔水腫等表現(xiàn)；氯化鈉組大鼠術(shù)后均有嚴(yán)重的膿毒癥表現(xiàn)：動物術(shù)后蘇醒延遲，逐漸出現(xiàn)精神萎靡、豎毛、寒顫、呼吸急促、呼吸困難及眼角分泌物等表現(xiàn)，剖腹可見渾濁膿血性滲液、惡臭、腸管水腫、變黑、肝腎充血水腫；而X組組動物術(shù)后各方面表現(xiàn)較輕。2各組大鼠6

6、小時肺組織濕/干重(W/D)比變化；與空白組相比，鹽水組大鼠肺濕/干重比明顯增大(5.1504～0.1102 vs4.543±0.1579，P＜0.01)；X組肺組織濕/干重比也顯著增加(4.74±0.08 vs 4.54±0.16，P＜0.01)；與NS組相比，X組肺組織濕/干重比顯著減小(4.74±0.08 vs 5.15±0.11，P＜0.01)。3各組大鼠6h血清MMP-9水平的變化：尾靜脈注入血必凈或鹽水6小時后，NS組血清中

7、MMP-9水平顯著高于Sham組(11.5358±1.7278 vs 4.4667±1.0116，P＜0.01)；X組水平也比Sham高(7.4946±1.8549 vs 4.4667±1.0116，P＜0.01)；與NS組相比，經(jīng)血必凈注射液治療后的大鼠血清中MMP-9水平下降(7.4946±1.8549 vs 11.5358±1.7278，P＜0.01)。4肺組織病理學(xué)改變：HE染色光鏡下觀察到Sham組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡間隔

8、無水腫，肺泡腔清晰；NS組肺泡間隔增寬、肺間質(zhì)充血、水腫，肺泡腔可見大量中性粒細(xì)胞浸潤，可見不同程度的肺不張、代償性肺氣腫等；X組改變明顯減輕但較假手術(shù)組重。電鏡下觀察：Sham組基本正常，內(nèi)皮細(xì)胞邊緣清楚、細(xì)胞連接緊密，胞內(nèi)可見少量吞飲小泡；NS組肺血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞連接模糊不清，胞漿內(nèi)含有大量吞飲小泡；X組內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi)有少量吞飲小泡，可見內(nèi)皮細(xì)胞間隙。 結(jié)論： 1.膿毒癥大鼠血清MMP-9水平明顯增高，升高的MMP-