封裝多聚脫氧核糖核苷酸的納米纖維水凝膠生物活性的研究及其治療慢性軟組織潰瘍的實(shí)驗研究.pdf

1、本文分為以下幾個部分:
　　第一部分:自組裝納米纖維水凝膠的制備及封裝多聚脫氧核苷酸的檢測
　　目的：介紹一種新型的自組裝納米纖維水凝膠的制備方法，并對其負(fù)載多聚脫氧核苷酸（PDRN）的形態(tài)學(xué)、粒徑、包封率、載藥量、緩釋性能及結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢測。
　　方法：購買IKVAV、RGD、FGL-PA多肽類片段，按不同比例和不同濃度進(jìn)行組合，通過層層自組裝合成納米纖維水凝膠，通過比較玻片上納米纖維水凝膠的流動時間，確定合成納米纖維水

2、凝膠的最佳配比。將PDRN按不同比例加入上述混合好的多肽溶液中，用同樣的方法確定納米纖維凝膠中加入胎盤提取液的最佳濃度。通過透射電鏡觀察納米纖維凝膠的形態(tài)結(jié)構(gòu)，運(yùn)用動態(tài)衍射檢測其粒度范圍，運(yùn)用紫外分光光度計檢測其包封率、載藥量及緩釋性能，運(yùn)用晶體衍射儀對其晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行驗證。
　　結(jié)果：通過透射電鏡證實(shí)成功合成了納米纖維水凝膠，確定了該水凝膠原料的最佳配比：IKVAV：RGD：FGL-PA=1:1:1，最佳原料配比濃度是0.6mg/

3、ml，水凝膠中加入PDRN的最佳比例是50％，粒度分析儀檢測其粒徑為212nm，符合1-1000納米材料范圍，紫外分光光度計結(jié)果顯示該水凝膠具有較高的載藥量（5.15mg/g）和較高的包封率（96.6%），緩釋性能的研究顯示該水凝膠的緩釋可長達(dá)4天，晶體衍射結(jié)果證實(shí)在水凝膠包裹PDRN的過程中，PDRN的結(jié)構(gòu)無明顯破壞。
　　結(jié)論：封裝PDRN的納米纖維水凝膠具有較高的載藥量、較高的包封率和較長的緩釋性能，是一種理想的基質(zhì)修復(fù)材料

4、。
　　第二部分:PDRN、sNAG納米纖維，以及sNAG納米纖維水凝膠負(fù)載PDRN生物學(xué)活性的檢測
　　目的：對PDRN、sNAG納米纖維以及sNAG納米纖維負(fù)載PDRN促進(jìn)細(xì)胞增生及血管再生的作用進(jìn)行研究。
　　方法：通過CCK8方法研究PDRN、sNAG納米纖維以及sNAG納米纖維負(fù)載PDRN對細(xì)胞增生的影響，通過RT-PCR以及Western-blotting研究PDRN、sNAG納米纖維以及sNAG納米纖維負(fù)

5、載PDRN對細(xì)胞因子釋放及血管再生的影響；通過三維機(jī)制侵入實(shí)驗研究sNAG納米纖維以及sNAG納米纖維負(fù)載PDRN對細(xì)胞遷移的影響；通過血漿、血小板蛋白粘附實(shí)驗研究sNAG納米纖維以及sNAG納米纖維負(fù)載PDRN對血液相容性的影響。
　　結(jié)果：通過上述實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，PDRN、sNAG納米纖維以及sN AG納米纖維負(fù)載PDRN均能促進(jìn)細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞因子的釋放并且促進(jìn)細(xì)胞遷，并且sNAG納米纖維負(fù)載PDRN的血液相容性最佳。
　

6、　結(jié)論：PDRN、sNAG納米纖維以及sNAG納米纖維負(fù)載PDRN均能促進(jìn)細(xì)胞增生及血管再生。
　　第三部分:PDRN、sNAG納米纖維，以及自組裝sNAG納米纖維水凝膠負(fù)載PDRN治療糖尿病小鼠皮膚潰瘍的療效
　　目的：通過動物實(shí)驗，比較PDRN、sNAG納米纖維以及sNAG納米纖維負(fù)載PDRN治療糖尿病小鼠皮膚潰瘍的效果。
　　方法：建立糖尿病小鼠皮膚潰瘍模型并分組，用RT-PCR以及Western-blottin

7、g分別檢測經(jīng)PDRN、sNAG納米纖維以及sNAG納米纖維負(fù)載PDRN處理后的小鼠相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。將創(chuàng)面組織進(jìn)行切片染色，觀察染色后的細(xì)胞增生、炎癥浸潤及血管新生情況。從造模當(dāng)天開始，定期記錄小鼠背部創(chuàng)面的開放傷口面積、傷口收縮度和表皮再生面積，從而比較各分組之間的傷口愈合度。通過恒定的速度牽拉傷口兩端的皮膚，記錄當(dāng)傷口崩裂時的牽拉力量和距離，從而比較各分組之間愈合傷口的強(qiáng)度。
　　結(jié)果：通過比較RT-PCR以及Western

8、-blotting的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PDRN、sNAG及sNAG+PDRN均能使糖尿病小鼠相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)升高，其中sNAG+PDRN組細(xì)胞因子的表達(dá)升高最明顯。通過HE染色及免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，PDRN、sNAG及sNAG+PDRN均能促進(jìn)細(xì)胞增殖及血管新生，進(jìn)而促進(jìn)傷口愈合，其中sNAG+PDRN組的細(xì)胞增殖及血管新生較其他組明顯。通過測量小鼠背部開放傷口的面積、傷口收縮度、表皮再生面積以及傷口愈合強(qiáng)度發(fā)現(xiàn)，PDRN、sNAG及sNAG+