CD40 DNA疫苗在干燥綜合征NOD鼠模型的實驗研究.pdf

1、目的：應用CD40基因片段的DNA疫苗免疫干燥綜合征NOD鼠模型，探討CD40 DNA疫苗對SS鼠模型免疫干預作用。
　　方法：分別設置疫苗組6只、空質粒組6只、生理鹽水（NS）組6只、SS模型組3只。純化制備含有編碼CD40基因片段的DNA疫苗，接種到NOD小鼠上。分別測定0周、6周、10周時小鼠免疫學及病理指標。HE染色光鏡下觀察小鼠頜下腺的病理變化，并分析小鼠灶性淋巴細胞浸潤數(shù)目及程度。應用流式細胞術檢測小鼠CD3+T細胞、

2、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD19+B細胞和漿細胞的比例。應用PCR研究頜下腺IL-1β，CD40，TNF-α mRNA相對表達水平。
　　結果：
　　（1）頜下腺病理在CD40 DNA疫苗治療6周時，疫苗組灶性淋巴細胞浸潤程度較空質粒組和NS組好轉。
　?。?）脾臟單細胞懸液在CD40DNA疫苗治療6周時，疫苗組、空質粒組及NS組三組間CD3+T細胞比例不同，差異有統(tǒng)計學意義（F=0.723，P=0.025），

3、疫苗組相對于空質粒組、NS組，CD3+T細胞比例明顯下降（P=0.013;P=0.022）。疫苗組CD3+T細胞占總細胞比例較基線組明顯下降（26.70±3.55 vs36.37±0.89，P=0.011）。三組間CD4+T細胞比例之間差異有統(tǒng)計學意義（F=8.614，P=0.017）。疫苗組較空質粒組、NS組比較，CD4+T細胞比例明顯下降（P=0.009;P=0.015）。疫苗組CD4+T細胞比例較基線值明顯降低（16.44±2.7

4、6 vs21.96±1.08，P=0.032）。疫苗組CD8+T細胞比例較基線組明顯下降（6.91±0.47 vs9.32±0.20，P=0.001）。疫苗組CD19+B細胞比例較基線組明顯下降（28.28±0.82，P=0.003），空質粒組B細胞比例較基線組下降亦有統(tǒng)計學意義（31.48±0.75，P=0.018）。三組間CD138+漿細胞/CD19+B細胞組間比較有統(tǒng)計學差異（F=9.736，P=0.013）。疫苗組和空質粒組與N

5、S組比較，漿細胞占CD19+B細胞比例明顯下降（P=0.007;P=0.012）。第10周時，疫苗組、空質粒組及NS組CD3+T細胞占總細胞比例較基線組均明顯升高（40.37±8.42。P=0.004;38.95±11.31。P=0.032;38.49±10.21。P=0.046）。空質粒組和NS組CD4+T細胞比例較基線組上升（24.19±0.86。P=0.049;24.34±0.58。P=0.028）。NS組CD8+T細胞比例較基線

6、組明顯升高（10.46±0.63。P=0.041）。
　　（3）CD40DNA疫苗治療NOD小鼠6周時，疫苗組頜下腺CD40 mRNA相對表達量較空質粒組和NS組降低，與空質粒組比較有統(tǒng)計學差異（0.51±0.31 vs1.56±0.53。P=0.042）。10周時，疫苗組TNF-α mRNA表達量相對于基線組比較顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（0.41±0.25 vs0.98±0.16。P=0.03）。
　　結論：CD40 D