WD患者ATP7B基因突變熱點(diǎn)及其與臨床表型相關(guān)性研究.pdf

1、課題背景:
　　 肝豆?fàn)詈俗冃裕℉epatolenticular degeneration, HLD）又名Wilson ?。╓ilson’ sdisease, WD），是一種常染色體隱性遺傳性銅代謝障礙性疾病。臨床主要表現(xiàn)為血清銅藍(lán)蛋白減低、肝硬化、進(jìn)行性加重的錐體外系癥狀、角膜色素環(huán)、精神癥狀等。
　　 WD基因存在高度的遺傳異質(zhì)性，且突變熱區(qū)和高頻突變位點(diǎn)具有區(qū)域、種族差異性。
　　 目前，關(guān)于WD患者基因型

2、和臨床表型之間的關(guān)系存在很大的爭(zhēng)議。本研究采用變性高效液相色譜法（denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC）技術(shù)對(duì)WD患者進(jìn)行基因檢測(cè)，并探討基因型和表型之間的關(guān)系。
　　 目的:
　　 采用快速、高效的DHPLC對(duì)WD患者進(jìn)行基因檢測(cè)，尋找中國人WD患者新的基因突變熱區(qū)和高頻突變位點(diǎn)，為建立可用于臨床的快速、簡(jiǎn)便的基因診斷方法奠定基礎(chǔ)；并研究中國人

3、WD患者基因高頻突變位點(diǎn)的基因型、基因突變類型與臨床表型的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.采用DHPLC 檢測(cè)來自72個(gè)不同家系的75例WD患者及其家屬樣本171例的ATP7B基因，其中包括144例雙親和27例同胞。以200名正常健康人為對(duì)照。
　　 2.收集上述WD患者的臨床資料、基因檢測(cè)結(jié)果，以ATP7B基因的第8、16 號(hào)外顯子Arg778Leu和Ile1148Thr 突變作為基因型，以錯(cuò)義突變和非錯(cuò)義突變

4、作為突變類型，將患者的性別、發(fā)病年齡、病程、臨床分型、首發(fā)癥狀及血清銅和血清銅藍(lán)蛋白檢測(cè)結(jié)果等臨床表型作為比較的指標(biāo)，探討中國人WD患者高頻基因突變位點(diǎn)的基因型與臨床表型的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1.75例WD患者ATP7B基因的21個(gè)外顯子經(jīng)DHPLC 檢測(cè)出53種不同的峰形圖。
　　 2.經(jīng)DNA 測(cè)序證實(shí)，75例WD患者共檢出13種多態(tài)和38種突變，包括24種錯(cuò)義突變、 5種無義突變、3種剪接突變、6種

5、移碼突變。并首次報(bào)道2種新多態(tài)：
　　 1839C>T （Ile613Ile），2922G>A (Trp974Trp)，及10種新突變(200例正常對(duì)照未發(fā)現(xiàn)相同形式的基因型)：1875-1876dupAATT, 2120A>G （Gln707Arg），2121+3A>T，2564C>A(Ser855Tyr)，2620G>C(Ala874Ser), 2761A>C （Ser921Arg）, 3236G>T（Cys1039Phe）

6、，3244-2A>C, 3446G>A （Gly1149Glu）, 3682A>T(Arg1228stop)。
　　 3.75例WD患者突變總的檢出率為90.67％(68/75),基因突變頻率為68.67％（103/150），Arg778Leu 突變的檢出率為42.67％（32/75），染色體突變頻率為22.67％（34/150），Ile1148Thr 突變的檢出率為18.67％（14/75），染色體突變頻率為9.3％（14/1

7、50），第8、12、16 號(hào)外顯子基因突變總的檢出率為48％（72/150）。
　　 4.75例患者中，ATP7B基因突變類型與患者的血清銅和血清銅藍(lán)蛋白檢測(cè)結(jié)果無顯著性差異（P>0.05）；無Arg778Leu 突變組的血清銅水平低于Arg778Leu 雜合突變組，有顯著性差異（P=0.012），無Arg778Leu 突變組的血清銅水平低于Arg778Leu純合突變組，有顯著性差異（P=0.021）；Ile1148Thr 雜合

8、突變組的血清銅藍(lán)蛋白水平高于無Ile1148Thr 突變組，有極顯著性差異（F=32.822，P=0.000）。
　　 5. 75例患者中，Ile1148Thr、Arg778Leu、ATP7B基因突變類型與患者的性別、發(fā)病年齡、病程、臨床分型、首發(fā)癥狀等臨床表型之間均無顯著性差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 DHPLC是一種可用于臨床的快速、簡(jiǎn)便的基因診斷方法；Ile1148Thr 突變是中國人WD患者