臨床感染患者耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐藥機(jī)制及毒力研究.pdf

1、目的：選取天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院臨床感染患者分離的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（Carbapenem resistantKlebsiella pneumoniae，CRKP），測(cè)定其對(duì)各類抗菌藥物的敏感性、統(tǒng)計(jì)感染患者的臨床特點(diǎn)以分析感染CRKP的危險(xiǎn)因素；探究CRKP耐藥機(jī)制與碳青霉烯類藥物敏感性的關(guān)系并檢測(cè)肺炎克雷伯菌高毒力莢膜血清型及毒力基因的分布情況。
　　方法：收集天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2014年5月至2015年5月臨床感染患者分離的

2、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌20株。采用全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀Vitek2 Compact儀器及配套藥敏卡對(duì)菌株進(jìn)行鑒定及藥敏試驗(yàn)，查詢分離菌株所屬患者的臨床資料，對(duì)患者年齡、性別、科室、住院天數(shù)、基礎(chǔ)疾病、分離標(biāo)本類型、是否曾經(jīng)入住 ICU、是否曾經(jīng)進(jìn)行過侵襲性操作、分離 CRKP前后抗生素使用情況及預(yù)后情況進(jìn)行討論；采用改良Hodge試驗(yàn)、乙二胺四乙酸（Ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）雙紙片試驗(yàn)、Ca

3、rbaNP試驗(yàn)、碳青霉烯類抑制法（Carbapenem Inactivation Method，CIM）四種表型試驗(yàn)初篩碳青霉烯酶；采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）檢測(cè)耐藥基因，包括碳青霉烯酶基因(KPC、IMP、VIM、NDM、SIM、OXA-48)、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因（TEM、SHV和CTX-M）、AmpC酶基因(DHA)、膜孔蛋白編碼基因（ompk35、ompk36）；采用拉絲試

4、驗(yàn)、生物被膜形成試驗(yàn)、血清殺傷試驗(yàn)用來檢測(cè)菌株毒力情況；PCR方法檢測(cè)莢膜血清型（K1、K2、K5、K20、K54、K57）及毒力基因（rmpA、aerobactin和fimH-1）。PCR陽性擴(kuò)增產(chǎn)物基因測(cè)序結(jié)果提交GenBank在線數(shù)據(jù)庫比對(duì)。
　　結(jié)果：20株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌對(duì)頭孢菌素類、碳青霉烯類等β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥率較高80％以上，對(duì)替加環(huán)素、阿米卡星及左氧氟沙星的耐藥率較低在30%以下。感染患者主要來自老年

5、醫(yī)學(xué)病區(qū)的高齡患者及兒科病區(qū)的新生兒患兒，標(biāo)本類型以呼吸道痰標(biāo)本為主，醫(yī)院獲得性感染是感染的主要來源。改良Hodge試驗(yàn)檢出KPC基因陽性11株(55%)，EDTA雙紙片試驗(yàn)檢出金屬酶陽性13株（65%），CIM試驗(yàn)陽性16株，CarbaNP試驗(yàn)檢出產(chǎn)A類酶11株，同時(shí)產(chǎn)A類酶、B類酶或D類酶9株；PCR結(jié)果表明，檢出碳青霉烯酶KPC和NDM基因，分別為7株（35%）和8株（40%），超廣譜β-內(nèi)酰胺酶以SHV基因檢出率最高，為16株（

6、80%），AmpC酶DHA基因檢出2株（10%），膜孔蛋白編碼基因ompk35和ompk36分別缺失8株（40%）和13株（65%）。耐藥基因組合分為7種方式，以同時(shí)產(chǎn)碳青霉烯酶、ESBLs和膜孔蛋白變異為主，占35%（7/20）；其次是僅由ESBLs引起的耐藥，占20%（4/20）；僅產(chǎn)碳青霉烯酶伴隨膜孔蛋白變異也占據(jù)一定比例，15%（3/20）；產(chǎn)ESBLs合并膜孔蛋白變異和碳青霉烯酶合并高產(chǎn)ESBLs各占10%（2/20），其他組

7、合方式10%（2/20）。rmpA基因陽性8株（40%），均為產(chǎn)碳青霉烯酶伴隨膜孔蛋白變異株，5株產(chǎn)KPC，2株產(chǎn)NDM，1株同時(shí)產(chǎn)KPC和NDM基因，其中5株還同時(shí)攜帶ESBLs基因。Aerobactin基因6株（30%）陽性，與rmpA基因同時(shí)陽性5株，4株產(chǎn)KPC基因。fimH-1基因20株（100%）全陽性。檢出高毒力莢膜血清型K1型3株、K57型1株，其中2株K1型同時(shí)攜帶rmpA和aerobactin基因，1株K1型和1株K

8、57型菌株僅產(chǎn)rmpA基因，4株均為產(chǎn)KPC基因菌株。
　　結(jié)論：本研究臨床感染患者分離耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌對(duì)替加環(huán)素、阿米卡星、左氧氟沙星和環(huán)丙沙星耐藥率較低，對(duì)頭孢菌素等β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥率較高。高齡患者和新生兒是醫(yī)院獲得性感染 CRKP的主要人群，侵襲性操作及環(huán)境消毒不合格是導(dǎo)致菌株院內(nèi)流行傳播的重要原因。臨床感染患者分離的 CRKP主要耐藥機(jī)制是產(chǎn)碳青霉烯酶KPC和NDM基因，超廣譜β-內(nèi)酰胺酶合并膜孔蛋白缺失也是