SNP位點(diǎn)rs11175194影響卵巢癌預(yù)后的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　卵巢癌是女性生殖器官常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率在中西方均呈上升的趨勢(shì)，對(duì)女性生命健康造成了嚴(yán)重的威脅。SNP是單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，其不同的堿基可以改變順勢(shì)作用元件的結(jié)構(gòu)影響相應(yīng)基因的表達(dá)。前期課題組在中國(guó)漢族女性上皮性卵巢癌患者中進(jìn)行的GWAS研究發(fā)現(xiàn)了SNP位點(diǎn)rs11175194與上皮性卵巢癌的發(fā)病相關(guān)。Rs11175194位于基因SRGAP1的1號(hào)內(nèi)含子上，因此猜測(cè)其可能對(duì) SRGAP1的轉(zhuǎn)錄具有一定的

2、調(diào)控作用，繼而通過(guò)改變SRGAP1的表達(dá)影響卵巢癌患者的發(fā)病和預(yù)后。因此本研究旨在探索SNP位點(diǎn)rs11175194的基因型是否影響SRGAP1的表達(dá)及對(duì)卵巢癌患者預(yù)后的影響，并且初步闡明SNP位點(diǎn)影響卵巢癌預(yù)后的分子機(jī)制。
　　方法：
　　本研究分析186例卵巢癌患者SNP位點(diǎn)rs11175194的基因型是否與卵巢癌患者的預(yù)后相關(guān)，然后用qRT-PCR的方法檢測(cè)64例與SNP位點(diǎn)基因型配對(duì)的卵巢癌患者組織中SRGAP1基因

3、mRNA的表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè)，分析其表達(dá)與基因型是否具有相關(guān)性。通過(guò)生物信息學(xué)網(wǎng)站預(yù)測(cè)SNP位點(diǎn)所處位置的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)以及SNP位點(diǎn)的生物學(xué)功能。按照SRGAP1表達(dá)的中位數(shù)分組，進(jìn)行生存分析，研究SRGAP1的表達(dá)是否與卵巢癌患者的預(yù)后相關(guān)，同時(shí)利用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中的卵巢癌患者信息進(jìn)行驗(yàn)證。構(gòu)建熒光素酶報(bào)告基因載體和染色質(zhì)免疫沉淀驗(yàn)證SNP位點(diǎn)rs11175194的功能。為了研究SRGAP1對(duì)卵巢癌發(fā)生發(fā)生的影響，應(yīng)用MTT實(shí)驗(yàn)，Tran

4、swell小室實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)SRGAP1對(duì)卵巢癌細(xì)胞系增殖侵襲遷移能力的影響。并通過(guò)藥物敏感實(shí)驗(yàn)，研究過(guò)表達(dá) SRGAP1對(duì)化療藥物紫杉醇和表柔比星耐藥性的影響。
　　結(jié)果：
　　SNP位點(diǎn)rs11175194的基因型與SRGAP1的表達(dá)量相關(guān)，G基因型的表達(dá)量高于A基因型。SNP位點(diǎn)所處的位置染色質(zhì)修飾主要是H3K27Ac，組蛋白這種修飾狀態(tài)是增強(qiáng)子的標(biāo)志。通過(guò)Transfac預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)NR1H4可以與SRGAP1上rs11175

5、194位點(diǎn)結(jié)合，通過(guò)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)，GEO數(shù)據(jù)庫(kù)和天津的表達(dá)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)， NR1H4與SRGAP1的表達(dá)具有相關(guān)性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（TCGA數(shù)據(jù)，r=0.154， p=0.002；GEO數(shù)據(jù)，r=0.393，p<0.05；天津數(shù)據(jù)r=0.467，p<0.05）。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)SNP位點(diǎn)rs11175194的G基因型具有增強(qiáng)子作用，染色免疫沉淀實(shí)驗(yàn)和測(cè)序證實(shí)了NR1H4可以與SRGAP1上rs11175194區(qū)域結(jié)合。按照SRGA

6、P1基因表達(dá)的中位數(shù)分組發(fā)現(xiàn)，高表達(dá) SRGAP1的患者預(yù)后差，并且通過(guò)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)驗(yàn)證結(jié)果一致，（p<0.05）。功能學(xué)研究發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)SRGAP1可以促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖但是對(duì)遷移和侵襲的沒(méi)有影響，藥物敏感實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)SRGAP1可以提高卵巢癌細(xì)胞系對(duì)化療藥物紫杉醇和表柔比星的抗性。
　　結(jié)論：
　　SNP位點(diǎn)rs11175194具有增強(qiáng)子功能，可以通過(guò)影響SRGAP1的表達(dá)影響卵巢癌患者的預(yù)后。SRGAP1高表達(dá)