異丁香酚體內外抗炎作用研究.pdf

1、以炎癥表現為特點的這種反應是自我抵御外部攻擊的一種獨特保護機制。當外界刺激過強或機體自身免疫能力下降時，就會出現炎癥過度反應，繼而增加多種疾病的發(fā)生率和死亡率，如慢阻肺、肝炎、癌癥。因此，如何有效地控制炎癥過度反應所引起的機體損傷已成為人們研究的重點。巨噬細胞是一種具有吞噬、介入炎癥的免疫細胞，在炎性進展過程中有著舉足輕重的地位。受到外界刺激時，許多炎性介質能夠被巨噬細胞產生，其中TNF-α和IL-6在炎性反應中發(fā)揮著重要作用。NF-κ

2、B已被公認為調控炎癥的首要機制， NF-κB有著廣泛的生物效應，包括從參與免疫及應激反應到決定增殖、分化、腫瘤發(fā)生、細胞凋亡和組織重構等細胞命運。NF-κB在體內被嚴格調控，一旦失控，就會引起多種疾病，包括癌癥、炎癥及免疫失調。
　　非甾體和甾體類的抗炎藥是臨床用于治療炎癥的中流砥柱。但這些藥物治療“治標”而非“治本”，且副作用大，因而急切需要發(fā)展一類毒副作用小、療效好的藥物。近年來，天然化合物因其特有的生物學活性而逐漸在醫(yī)療領域

3、得到注意。
　　桉葉油、薄荷醇等是一種從植物、草藥或香料提取的具有芳香和揮發(fā)性的液體。異丁香酚是一種接近淡黃色的油狀液體，天然存在于肉豆蔻、肉桂和丁香中?，F代藥理學研究表明其具有解熱鎮(zhèn)痛、抗炎、麻醉等藥效，又因為沒有太大的壞處，很少保留在體內，所以一直被人們所青睞。近年來，一系列與異丁香酚相關的物質的抗炎活性逐漸引發(fā)人們的注視。
　　因此，本文選取了4種揮發(fā)油進行結構確證和純度測定，采用LPS誘導的方法構建急性體外模型，采用

4、SRB法和LDH法測定各揮發(fā)油的細胞毒性作用，并選取無細胞毒性濃度范圍開展揮發(fā)油抗炎實驗;通過一氧化氮(NO)和細胞因子的測定，比較了4種揮發(fā)油的抗炎能力，最終選取異丁香酚為深入研究對象。
　　接著，對異丁香酚進行進一步考察。巨噬細胞吞入染料的多少因其吞噬能力的不同而有區(qū)別，中性紅的吞入可反映其吞噬能力的強弱;細胞上清中一氧化氮(NO)的變化可以通過nitrate reduction法測定;酶聯免疫吸附法測定IL-6、TNF-α、

5、PGE2的產生，RT-PCR法測定相關mRNA的表達;western blot測IκBα的降解;免疫熒光法檢測NF-κB的核轉移。結果表明異丁香酚能夠抑制LPS誘導產生的炎癥介質的釋放且成劑量依賴性，并且對促炎因子及其轉錄的抑制可能是通過調控NF-κB p65相關的通路來實現的。
　　最后，考察了異丁香酚的體內抗炎能力。采用香煙煙霧提取物(CSE)腹腔注射的方法構建了肺部炎癥模型，并通過高效液相的方法進行了定量;分別從肺灌洗液中巨

6、噬細胞的吞噬能力、血清中細胞因子的變化、肺組織中細胞因子基因表達變化三部分考察了炎癥變化情況;通過HE染料染色直接觀察肺組織的改變;結果表明異丁香酚可以抑制CSE作用產生的吞噬能力、IL-6、TNF-α、IL-2的升高，并且能夠抑制它們mRNA的表達;病理形態(tài)觀察表明異丁香酚能夠改善CSE誘導形成的肺部炎癥病理現象;免疫組化實驗證明異丁香酚可以阻礙NF-κB p65的核轉移。
　　綜上所述，本研究初步明確了異丁香酚的抗炎機制，它能