液體深層發(fā)酵樺褐孔菌三萜類化合物的鑒定和生物合成的促進.pdf

1、樺褐孔菌是一種具有生物活性的白腐真菌，曾被譽為中國最具有發(fā)展前景的藥用真菌之一。樺褐孔菌具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化、降血糖和免疫調(diào)節(jié)等生物活性，所以近年來備受學者們的關注。野生樺褐孔菌稀少，價格昂貴且人工培育技術不成熟等，使得樺褐孔菌來源較少，不能滿足人們?nèi)找嬖鲩L的需求。而隨著液體深層發(fā)酵技術的進步，學者紛紛開始將液體深層發(fā)酵的技術運用于樺褐孔菌生產(chǎn)中。
　　因為樺褐孔菌液體發(fā)酵培養(yǎng)受氧氣、營養(yǎng)物質(zhì)等限制，所以樺褐孔菌不能大批量的生

2、產(chǎn)，使得三萜類化合物產(chǎn)量較低。研究發(fā)現(xiàn)柑橘皮能刺激牛樟芝中次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生。本論文首先對液體發(fā)酵樺褐孔菌的三萜類化合物進行了分離，然后研究柑橘屬果皮對液體發(fā)酵樺褐孔菌的三萜化合物產(chǎn)生的促進作用，分別以菌絲體量、總三萜含量和五種重要三萜單體產(chǎn)量為依據(jù)，對比分析柑橘屬果皮提取物和柑橘屬果皮粉末這兩種不同形式的添加對樺褐孔菌液體深層發(fā)酵產(chǎn)三萜的影響，并通過研究柑橘屬果皮精油和果膠的作用初步探討柑橘屬果皮對液體發(fā)酵樺褐孔菌的三萜產(chǎn)生的促進機理

3、。
　　研究結果如下所示：
　　1、研究了不同溶劑提取菌絲體中三萜化合物，研究發(fā)現(xiàn)異丙醇更適合作為提取劑；經(jīng)過提取、萃取、柱色譜分離后的三萜化合物的分離效果較好，適合進行接下來的分離純化，同時羊毛甾醇在這一過程提取率為25.31％。
　　2、通過在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入柑橘屬果皮提取物，研究樺褐孔菌發(fā)酵過程中菌絲體及三萜含量變化。研究結果發(fā)現(xiàn)四種柑橘屬果皮提取物均能刺激樺褐孔菌菌絲體的生長，其中柚子皮提取物既能促進菌絲體的生

4、長還能促進三萜化合物的產(chǎn)生。當柚子皮提取物濃度為10 g/L時，此時，菌絲體生物量達到最大，為11.68 g/L，此時三萜含量為84.04 mg/g。
　　3、在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加柑橘屬果皮粉末后發(fā)現(xiàn)柑橘皮粉末不能對樺褐孔菌菌絲體生長產(chǎn)生刺激作用，但卻能改變?nèi)苹衔锏漠a(chǎn)量。綜合菌絲體量和三萜產(chǎn)量，最佳的柑橘屬果皮粉末是柚子皮粉末，最佳濃度為1g/L時，樺褐孔菌菌絲體生物量和三萜含量分別為10.08 mg/g和83.16 mg/g，

5、其中三萜含量比對照組培養(yǎng)基提高了28.09%。
　　4、為了分析柑橘屬果皮對樺褐孔菌液體發(fā)酵的影響化學機理，分別提取了柑橘皮中的果膠和精油，將其加入到對照培養(yǎng)基中。結果顯示：添加果膠或果膠與精油的混合物時，樺褐孔菌死亡。而加入0.15 mL精油提取物，既能促進樺褐孔菌菌絲體生長，又能促進三萜化合物的積累。當其添加量為0.1 mL時，樺褐孔菌胞內(nèi)三萜含量增加。因此精油可能是柑橘屬果皮中刺激樺褐孔菌產(chǎn)三萜的化學成分。
　　5、采

6、用HPLC定量分析菌絲體內(nèi)含有5種重要三萜化合物的含量。其中不同的添加劑（10 g/L柚子皮提取物、1g/L柚子皮粉末、0.1mL和0.15 mL的精油提取物）對這幾種三萜單體含量的影響是不同的，添加促進劑后，既會促進其中某些成分的產(chǎn)生，也會有抑制作用。添加這幾種物質(zhì)后，培養(yǎng)基中得到的白樺脂醇、木栓酸、樺褐孔菌醇、3β-hydroxy-lanosta-8,24-dien-21-al和羊毛甾醇含量達到最大值，比對照培養(yǎng)基中所對應的各個成分