樺褐孔菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化及甾醇類化合物的調(diào)控.pdf

1、樺褐孔菌(Inonotusobliquus(Fr.)Pilat),是珍稀的大型藥用真菌,在俄羅斯已有一百多年的應(yīng)用歷史,能治療多種疾病.目前美國、韓國及日本正加大對這種菌的研究,而我國尚處于初級研究階段.自美國的HumfeldH等對蘑菇的深層發(fā)酵進(jìn)行了研究,并提出用發(fā)酵法來培養(yǎng)蘑菇的菌絲體后,研究者們紛紛用這種方法進(jìn)行多種菌類的發(fā)酵.而國內(nèi)外對樺褐孔菌的深層發(fā)酵研究甚少,國內(nèi)目前僅有一篇生物量方面的報道.對于其化學(xué)成分分析、調(diào)控及藥理學(xué)

2、方面的研究尚屬空白.
　　本文通過對野外采集的樺褐孔菌菌核體進(jìn)行組織分離,得到PDA菌種,然后對該菌進(jìn)行深層發(fā)酵培養(yǎng).為了得到大量的菌絲體和多糖,應(yīng)用單因子試驗(yàn)和正交試驗(yàn)相結(jié)合分別得到菌絲體和多糖的優(yōu)化培養(yǎng)基,并用DNS法測定發(fā)酵液中還原糖濃度;石油醚提取菌絲體中弱極性物質(zhì)各成分后用GC-MS對其分析和鑒定.在此試驗(yàn)基礎(chǔ)上,為了提高菌絲體中甾醇類化合物含量,首先優(yōu)化了甾醇類化合物合成培養(yǎng)基,并通過人工干預(yù)該類化合物合成途徑關(guān)鍵酶,

3、對甾醇類化合物進(jìn)行上調(diào)因子調(diào)控研究,以達(dá)到進(jìn)一步提高甾醇類物質(zhì)含量的目的,結(jié)果均用GC-MS分析.同時,對發(fā)酵胞內(nèi)多糖進(jìn)行了藥理學(xué)研究,結(jié)果用試劑盒檢測.得出結(jié)論如下:
　　1.在所選的幾種碳、氮源中,葡萄糖是樺褐孔菌菌絲體生長、胞內(nèi)粗多糖和甾醇類化合物合成的最佳碳源,麥芽糖是胞外粗多糖合成的最佳碳源;蛋白胨和酵母膏的混合物是最佳氮源;起始pH5.5最適合菌絲體生長,起始pH6.5最有利于胞內(nèi)、外粗多糖和甾醇類化合物的合成.

4、>　　2.3％的葡萄糖最適合菌絲體生長和胞外粗多糖的合成,0.4%的蛋白胨和0.2%的酵母膏最適合菌絲體的生長,0.6%的蛋白胨和0.3%的酵母膏最有利于胞外粗多糖的合成.
　　3.菌絲體最佳培養(yǎng)基配方組成為:2.5%葡萄糖,0.4%蛋白胨,0.2%酵母膏,起始pH為5.5;胞外粗多糖最佳培養(yǎng)基配方為:3.5%葡萄糖,0.6%蛋白胨,0.2%酵母膏,起始pH為6.5.
　　4.在菌絲體最佳發(fā)酵培養(yǎng)基中,還原糖的利用率達(dá)99.

5、9%,pH由5.48降至4.09,最高菌絲體干重可達(dá)10.26g/L.
　　5.發(fā)酵菌絲體與野生子實(shí)體的弱極性組成成分存在一定差異.其中,羊毛甾醇是野生子實(shí)體中的主要成分,而菌絲體中芳香類化合物和麥角固醇是主要成分.
　　6.4.5mMCa2＋對麥角固醇和羊毛甾醇上調(diào)最顯著,其含量分別為2.54mg/g和0.48mg/g,同時能獲得9.4g/L的干重菌絲體.
　　7.8.0μM的Cu2＋不僅對麥角固醇和羊毛甾醇有顯著的

6、提高作用,同時不影響菌絲體生長,其中,兩種甾醇的含量分別為2.88mg/g和1.32mg/g.
　　8.7.0×10-7μM的Ag＋對麥角甾醇的影響最顯著,含量達(dá)2.72mg/g,而2.94×10-5μM的Ag＋能使羊毛甾醇的含量提高到2.05mg/g,菌絲體隨著Ag＋濃度的增加而不斷的減少,最大值與最小值之間相差2.10g/L.
　　9.當(dāng)麥芽糖或葡萄糖作碳源,蛋白胨和酵母膏作混合氮源時,其發(fā)酵產(chǎn)物中的胞內(nèi)多糖能顯著刺激巨