bcl-2基因主要斷裂點(diǎn)區(qū)mbr在基因表達(dá)調(diào)控中的作用.pdf

1、第一部分利用熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)研究bcl-2mbr的調(diào)控功能 14號和18號染色體的易位即t(14；18)(q32；q21)是濾泡性淋巴瘤發(fā)生的關(guān)鍵步驟。位于bcl-2基因3'端非翻譯區(qū)(3，-UTR)的bcl-2基因主要斷裂點(diǎn)區(qū)(mbr)是發(fā)生該易位的主要位點(diǎn)。bcl-2mbr在一定的條件下可以形成穩(wěn)定的“三鏈”DNA(triplexDNA)結(jié)構(gòu)，而“三鏈”DNA結(jié)構(gòu)在DNA復(fù)制和基因轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控中具有重要的作用。bcl-

2、2mbr是核基質(zhì)附著區(qū)(MAR)，其3'端的AT豐富區(qū)是核基質(zhì)蛋白SATB1結(jié)合所必須。已知SATB1還是重要的轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)節(jié)多個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄活性。以上的研究表明mbr可能在bcl-2基因的表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮重要的作用。 為了研究bcl-2基因的mbr序列在調(diào)節(jié)基因活性中的作用，探討轉(zhuǎn)錄因子SATB1與bcl-2mbr功能之間的關(guān)系，我們利用熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)在不同的細(xì)胞系中研究bcl-2mbr對其下游報(bào)告基因活性的影響以及SAT

3、B1與mbr調(diào)控功能之間的關(guān)系。結(jié)果顯示mbr可以上調(diào)報(bào)告基因的表達(dá)，去除了SATB1結(jié)合位點(diǎn)后的mbr即喪失了其調(diào)控基因活性的功能。在細(xì)胞中過表達(dá)SATB1可以增強(qiáng)mbr上調(diào)報(bào)告基因活性的作用。 我們的研究結(jié)果證實(shí)bcl-2mbr具有調(diào)節(jié)基因活性的功能，并且其功能受到轉(zhuǎn)錄因子SATB1的影響。 第二部分利用mbr+/mbr-Nalm-6雜合子細(xì)胞系研究bcl-2mbr的調(diào)控功能 在第一部分研究中我們通過構(gòu)建熒光

4、素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒及細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)初步證明了bcl-2基因的mbr具有調(diào)節(jié)基因活性的功能，并且其調(diào)控功能受到轉(zhuǎn)錄因子SATB1的影響。但是bcl-2mbr位于bcl-2基因3'端非翻譯區(qū)并且距離bcl-2基因啟動(dòng)子約200多kb，在體內(nèi)它是否能夠克服這樣長的距離調(diào)節(jié)bcl-2基因的活性是我們必須回答的問題。為了更進(jìn)一步探討bcl-2mbr在bcl-2基因表達(dá)調(diào)控中的作用，本實(shí)驗(yàn)室成功構(gòu)建了單等位基因mbr序列敲除的mbr+/mbr-Na

5、lm-6雜合子細(xì)胞系。在此基礎(chǔ)上我們采用熒光定量PCR的方法比較mbr+/mbr-Nalm-6雜合子細(xì)胞中bcl-2野生型等位基因與mbr打靶的等位基因之間mRNA水平的差異，以觀察mbr在bcl-2基因調(diào)控中的作用。同時(shí)對定量PCR引物對的擴(kuò)增效率進(jìn)行了評價(jià)。為了探討SATB1與mbr功能之間的關(guān)系，在SATB1高表達(dá)的Jurkat細(xì)胞中采用RNA干擾的方法干擾SATB1蛋白表達(dá)后檢測bcl-2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示敲除mbr的bcl