萬古霉素敏感性下降的金黃色葡萄球菌分子流行病學(xué)及表型特征研究.pdf

1、目的:
　　 近年來，隨著甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA)感染率的上升和萬古霉素的廣泛使用，臨床上出現(xiàn)了萬古霉素敏感性下降的金葡菌，包括萬古霉素中介的金葡菌(vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus，VISA)和異質(zhì)性萬古霉素中介的金葡菌(heterogeneous vancomycin

2、-intermediate Staphylococcus aureus，hVISA)。
　　 評價三種檢測hVISA/VISA方法的可靠性和臨床應(yīng)用價值;了解遼寧地區(qū)hVISA/VISA的發(fā)生率及體外藥敏情況;研究遼寧地區(qū)hVISA/VISA的分子流行病學(xué)及表型特征。
　　 方法:
　　 1、菌株選取:收集2007年1月～2011年1月遼寧地區(qū)2所大型教學(xué)醫(yī)院（中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院和中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院）

3、從臨床各類型標(biāo)本中分離的非重復(fù)金葡菌757株，包括369株MRSA和388株MSSA。
　　 2、評價三種檢測方法:隨機選取200株非重復(fù)金葡菌(MRSA和MSSA各100株)，以PAP-AUC作為金標(biāo)準(zhǔn)，評價BHIA-3V、MHA-5T和MET三種檢測方法的可靠性和臨床應(yīng)用價值。
　　 3、調(diào)查hVISA/VISA的發(fā)生率:首先采用最佳篩選法（BHIA-3V）進行hVISA/VISA的初篩，然后以參考方法(PAP-AU

4、C)進行確認(rèn)。
　　 4、體外藥敏試驗:運用紙片擴散法和微量肉湯稀釋法測定初篩陽性菌株對15種新老抗菌藥物的敏感性。
　　 5、分子分型:運用多重PCR技術(shù)對hVISA/VISA分別進行MLST、spa、 agr和SCCmec分型，并進行PVL毒力基因檢測。
　　 6、表型特征研究:通過δ-溶血表達(dá)、生物膜形成和自溶活性試驗，研究hVISA/VISA臨床菌株的表型特征變化。
　　 結(jié)果:
　　 1

5、、菌株來源:757株金葡菌中含369株(48.7％) MRSA和388株(51.3％) MSSA，均經(jīng)頭孢西丁紙片擴散法和PCR檢測mecA基因法聯(lián)合確認(rèn)。菌株的標(biāo)本類型如下:痰液(n=249)、膿汁(n=208)、血液(n=137)、分泌物(n=84)、引流液(n=35)、傷口(n=23)及其它來源(n=21)。
　　 2、最佳篩選方法(BHIA-3V):200株金葡菌中，PAP-AUC確認(rèn)出15株hVISA，未檢出VISA。

6、BHIA-3V篩選出陽性菌49株，正確確認(rèn)出15株hVISA，敏感性和特異性分別為100％和81.6％。
　　 3、hVISA/VISA的發(fā)生率:757株金葡菌中，BHIA-3V篩選出陽性菌209株(120株MRSA和89株MSSA)。經(jīng)PAP-AUC確認(rèn)，其中76株(60株MRSA和16株MSSA)為hVISA;微量肉湯稀釋法檢出4株（3株MRSA和1株MSSA）VISA，萬古霉素MIC值均為4μg/mL。遼寧地區(qū)hVISA/

7、VISA的發(fā)生率分別為10.0％(76/757)和0.5％(4/757)。
　　 4、體外藥敏試驗:209株(129株VSSA和80株hVISA/VISA)金葡菌對利奈唑胺、達(dá)托霉素和替加環(huán)素三種新型抗菌藥物均敏感。與MR-VSSA相比，MR-hVISA和MR-VISA對非β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物（氯霉素、復(fù)方新諾明和利福平）的耐藥率更高。與MS-VSSA相比，MS-hVISA和MS-VISA對所有抗菌藥物的耐藥率更高。
　　

8、 5、分子分型:80株hVISA/VISA中發(fā)現(xiàn)12個spa型別，其中t002型59株，占73.8％(59/80);t030型6株，占7.5％(6/80);t037、t045、t105、t386和t437型各2株，分別占2.5％(2/80); t034、t163、t189、t548和t2592型各1株，分別占1.3％(1/80)。此外還發(fā)現(xiàn)7個ST型別，其中ST5型64株，占80％(64/80); ST239型8株，占10％(8/80

9、); ST59型3株，占3.8％(3/80); ST1型2株，占2.5％(2/80); ST88、ST188和ST398型各1株，分別占1.3％(1/80)。對63株MR-hVISA和MR-VISA進行SCCmec基因島分型，共發(fā)現(xiàn)4個SCCmec型別，其中Ⅱ型54株，占85.7％(54/63);Ⅲ型5株，占7.9％(5/63);V型2株，占3.2％(2/63);Ⅳ型1株，占1.6％(1/63);1株(1.6％)未能分型。依據(jù)agr分型

10、將80株分為4個型別，其中Ⅱ型64株，占80％(64/80);Ⅰ型13株，占16.3％(13/80);Ⅲ型2株，占2.5％(2/80);Ⅳ型1株，占1.3％(1/80)。
　　 6、表型特征變化:6-溶血表達(dá)試驗的結(jié)果顯示，VSSA、hVISA和VISA中agr功能缺失表型分別為29株(22.5％，29/129)、66株(86.8％，66/76)和4株(100％，4/4)。生物膜形成試驗的結(jié)果顯示，VSSA、hVISA和VISA

11、的平均OD值分別為2.283(1.180～3.560)、1.469(0.769～2.129)和1.125(0.917～1.377)。自溶試驗的結(jié)果表明，hVISA/VISA臨床菌株的自溶活性較VSSA有所降低。
　　 結(jié)論:
　　 1、鑒于BHIA-3V篩選法極佳的敏感性，臨床實驗室可采用該方法篩查hVISA/VISA，陽性結(jié)果進一步用PAP-AUC加以確認(rèn)。
　　 2、遼寧地區(qū)VISA的發(fā)生率低，但hVISA的