臨床血流感染患者金黃色葡萄球菌耐藥機(jī)制及分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的：調(diào)查我院臨床血流感染患者分離的金黃色葡萄球菌對各類抗菌藥物的敏感性及其耐藥機(jī)制，了解多種耐藥基因及毒力基因的分布情況，分析耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)醫(yī)院內(nèi)感染的分子流行病學(xué)特征，指導(dǎo)臨床有效控制該菌在醫(yī)院內(nèi)的傳播。
　　 方法：收集2006年1月至2011年8月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院臨床分離的非重復(fù)血流感染的金黃色葡萄球菌60株，應(yīng)用Vitek-2 compact細(xì)菌自動分析系統(tǒng)及配套鑒定卡、藥敏卡對細(xì)菌進(jìn)行菌種鑒定

2、及藥敏試驗(yàn);頭孢西丁紙片擴(kuò)散法篩選MRSA;應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法檢測耐藥基因mecA基因、紅霉素核糖體甲基化酶基因（ermA，ermB，ermC）、氨基糖苷類修飾酶基因(aac(6')/aph(2")、aph(3')-Ⅲ、ant(4'4"))、耐消毒劑基因(qacA)和毒力基因殺白細(xì)胞素基因(pvl)、腸毒素基因(sea、seb、sec1、sed、see)及中毒性休克綜合征毒素-1基因(tst)。選取PCR陽性產(chǎn)物進(jìn)行測序，并

3、與GenBank在線數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對。應(yīng)用脈沖場凝膠電泳(PFGE)技術(shù)和SCCmec分型技術(shù)對MRSA進(jìn)行分子流行病學(xué)研究，確定菌株的流行情況及菌株間的親緣關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 (1)60株金黃色葡萄球菌對萬古霉素、利奈唑胺、替加環(huán)素、替考拉寧敏感率為100.0％，對莫西沙星、利福平、左氧氟沙星、頭孢西丁、苯唑西林的敏感率大于78.0％，對青霉素、紅霉素、克林霉素敏感率低于40.0％。頭孢西丁耐藥菌株13株(21.

4、7％)，判定為MRSA。
　　 (2) PCR檢測結(jié)果表明，60株金黃色葡萄球菌攜帶耐藥基因mecA13株(21.7％)、ermA10株(16.7％)、ermB18株(30.0％)、ermC18株(30.0％)、aac(6')/aph(2")26株(43.3％)、aph(3')-Ⅲ6株(10.0％)、qacA3株(5.0％)。ermA、qacA只在MRSA中檢出，ermC、aac(6')/aph(2")、aph(3')-Ⅲ三種基

5、因在MRSA中的檢出率高于甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(MSSA)，攜帶ermB的菌株全部為MSSA，所有菌株中均未檢出ant(4'4")基因。
　　 (3)60株金黃色葡萄球菌中毒力基因檢測結(jié)果為pvl4株(6.7％)、sea20株(33.3％)、seb3株(5.0％)、sec19株(15.0％)、sed7株(11.7％)，未檢出see及tst基因。MRSA只攜帶sea一種毒素基因并且檢出率高于MSSA，其它4種毒素基因pvl、

6、seb、sec1、sed只在MSSA中檢出。6株同時攜帶sec1和sed兩種毒素基因，2株同時攜帶sea和sec1基因，1株同時攜帶sea和sed基因。陽性PCR產(chǎn)物經(jīng)測序后與GenBank數(shù)據(jù)庫比對均為目的基因。
　　 (4) SCCmec分型結(jié)果顯示11株MRSA為SCCmecⅢ型，2株未能分型。
　　 (5) PFGE分型結(jié)果顯示13株MRSA分為4型(A-D)其中A型2株、A1型2株、A2型1株、A3型1株、A4

7、型2株、A5型1株、B型2株、C型1株、D型1株。
　　 結(jié)論：本次研究的臨床血流感染患者金黃色葡萄球菌對萬古霉素、利奈唑胺、替加環(huán)素、替考拉寧敏感率均為100％，莫西沙星、利福平、左氧氟沙星、頭孢西丁、苯唑西林敏感率較高，對青霉素、紅霉素、克林霉素敏感率低。血流感染金黃色葡萄球菌同時攜帶多種耐藥基因和毒素基因，MRSA攜帶耐藥基因的種類多于MSSA，但是MSSA攜帶毒素基因種類多于MRSA。血流感染金黃色葡萄球菌攜帶的erm基