人股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中E-FABP與FAS的表達(dá).pdf

1、背景:
　　 下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥(ArteriosclerosisObliterans，ASO)是全身動(dòng)脈粥樣硬化(Arteriosclerosis，AS)的局部表現(xiàn)。近年來，隨著生活水平的提高及人口老齡化，發(fā)病率逐年上升，ASO的臨床表現(xiàn)主要為間歇性跛行、靜息痛、缺血性潰瘍甚至壞疽等，嚴(yán)重影響患者的生命安全和生活質(zhì)量。目前對ASO的治療包括內(nèi)科藥物治療、外科手術(shù)及基因和干細(xì)胞移植等，治療效果均不容樂觀。ASO發(fā)病機(jī)制尚不十分明

2、確，主要的學(xué)說包括損傷應(yīng)答學(xué)說、脂質(zhì)滲入學(xué)說、單核巨噬細(xì)胞作用學(xué)說等。近來研究認(rèn)為AS是血脂紊亂和炎癥反應(yīng)共同參與的慢性疾病。積極研究ASO的發(fā)病機(jī)制和改進(jìn)診斷治療方法，爭取早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，提高生存率，降低截肢率，改善患者生活質(zhì)量，意義重大。
　　 表皮型脂肪酸結(jié)合蛋白（EpidermalFattyAcidBindingProtein，E-FABP）是脂肪酸結(jié)合蛋白(FattyAcidBindingProteins，F(xiàn)A

3、BPs)的一個(gè)亞型，是能把脂肪酸從細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)如巨噬細(xì)胞等脂肪酸利用位點(diǎn)，在長鏈脂肪酸的代謝中起重要作用的一種低分子質(zhì)量的胞漿蛋白。研究顯示脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白（Adipocytefattyacidbindingprotei，A-FABP）在人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)，尤其在巨噬細(xì)胞內(nèi)表達(dá)增高。E-FABP和A-FABP高度同源。脂肪酸合成酶(FattyAcidSynthase，F(xiàn)AS)是體內(nèi)催化合成長鏈飽和脂肪酸的關(guān)鍵酶，研究表

4、明乳腺癌中E-FABP可能結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)FAS合成的長鏈脂肪酸到細(xì)胞內(nèi)代謝位點(diǎn)。在人股動(dòng)脈粥樣硬化的斑塊中，E-FABP與FAS的表達(dá)是否有變化及兩者關(guān)系情況，尚未見文獻(xiàn)報(bào)告。
　　 目的:
　　 探討人股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中表皮型脂肪酸結(jié)合蛋白與脂肪酸合成酶表達(dá)水平的變化及意義。
　　 方法:
　　 1.收集鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院2010年10月至2012年5月股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)膜剝脫術(shù)中獲取的股動(dòng)脈粥樣硬化

5、斑塊標(biāo)本21例，其中男性12例，女性9例，平均年齡56.73±6.23歲，每位患者術(shù)前均經(jīng)彩超和下肢動(dòng)脈造影確診。同期收集我院普外科外傷性脾破裂脾切除術(shù)中獲取的脾動(dòng)脈標(biāo)本13例，其中男性8例，女性5例，平均年齡52.12±3.41歲。所有入選患者術(shù)前均排除腫瘤、全身炎癥性疾病、自身免疫性疾病等。每位受試患者均簽訂《人股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊研究和知情同意書》。術(shù)中獲取標(biāo)本后簡單去除殘留血跡和周圍組織后，每個(gè)標(biāo)本分為兩等份，一份用10％甲醛固定

6、，一份放入液氮罐轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　 2.HE染色組織形態(tài)學(xué)觀察，并將股動(dòng)脈粥樣斑塊分為不穩(wěn)定斑塊組（12例）和穩(wěn)定斑塊組（9例），13例正常脾動(dòng)脈組為對照組。
　　 3.免疫組織化學(xué)SP法檢測各組標(biāo)本中E-FABP與FAS蛋白的表達(dá)，分析斑塊中E-FABP與FAS蛋白表達(dá)變化的意義及兩者表達(dá)之間的關(guān)系。
　　 4.逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測各組標(biāo)本中E-FABP與FASmRNA的表

7、達(dá)，分析斑塊中E-FABP與FASmRNA表達(dá)變化的意義及兩者表達(dá)之間的關(guān)系。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果用(x)±s表示，3組E-FABP、FAS蛋白和mRNA表達(dá)的比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t法，應(yīng)用Pearson相關(guān)分析動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中E-FABP、FAS蛋白和mRNA表達(dá)的關(guān)聯(lián)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 一、病理形態(tài)學(xué)觀察

8、
　　 HE染色顯示對照組脾動(dòng)脈三層（內(nèi)膜、中膜、外膜）完整，內(nèi)外彈力層均可見，細(xì)胞呈多層環(huán)狀分布排列，內(nèi)皮細(xì)胞呈線狀連續(xù)排列;不穩(wěn)定斑塊組細(xì)胞排列紊亂，斑塊內(nèi)脂質(zhì)壞死核心面積與斑塊面積之比大于等于40％，脂質(zhì)核心常呈偏心型，斑塊內(nèi)可見大量的泡沫細(xì)胞和炎性細(xì)胞，可見膽固醇結(jié)晶及新生血管，纖維帽薄;穩(wěn)定性斑塊組脂質(zhì)壞死核心面積與斑塊面積之比小于40％或沒有，纖維帽較厚，泡沫細(xì)胞及炎性細(xì)胞少見，可見鈣化灶。
　　 二、免疫組

9、織化學(xué)結(jié)果
　　 1.E-FABP蛋白在不穩(wěn)定斑塊組和穩(wěn)定斑塊組中均有較強(qiáng)表達(dá)，在對照組中有微量表達(dá)，E-FABP蛋白棕黃色顆粒主要聚集在炎性細(xì)胞和泡沫細(xì)胞浸潤的區(qū)域。3組中E-FABP的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=35.554，P＜0.001)。與對照組(1.950±0.069)比較，動(dòng)脈粥樣斑塊中E-FABP蛋白的表達(dá)明顯增高(P＜0.001)，不穩(wěn)定斑塊組E-FABP蛋白的表達(dá)（2.155±0.060）高于穩(wěn)定斑塊組（2.0

10、81±0.051）(P=0.011)。
　　 2.FAS蛋白在不穩(wěn)定斑塊組和穩(wěn)定斑塊組中均有較強(qiáng)表達(dá)，在對照組中有少量表達(dá)，F(xiàn)AS蛋白棕黃色顆粒主要聚集在炎性細(xì)胞和泡沫細(xì)胞浸潤的區(qū)域。3組中FAS蛋白的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=125.843，P＜0.001)。與對照組(1.971±0.038)比較，動(dòng)脈粥樣斑塊中FAS蛋白的表達(dá)明顯增高(P＜0.001)，不穩(wěn)定斑塊組FAS蛋白的表達(dá)(2.170±0.028)高于穩(wěn)定斑塊組（2

11、.083±0.024）(P＜0.001)。
　　 3.相關(guān)性分析顯示，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中E-FABP與FAS蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)（r不穩(wěn)定組=0.907,P＜0.001;r穩(wěn)定組=0.675，P=0.046），而在對照組中兩者無相關(guān)性(r=0.138,P=0.654)。
　　 三、RT-PCR結(jié)果
　　 1.3組中E-FABPmRNA的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=11.142，P＜0.001)。與對照組（1.156±

12、0.144）比較，動(dòng)脈粥樣斑塊中E-FABPmRNA的表達(dá)明顯增高(P＜0.001)，不穩(wěn)定斑塊組E-FABPmRNA的表達(dá)（1.593±0.312）高于穩(wěn)定斑塊組（1.365±0.206）(P=0.033)。
　　 2.3組中FASmRNA的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=11.176，P＜0.001)。與對照組（1.103±0.149）比較，動(dòng)脈粥樣斑塊中FASmRNA的表達(dá)明顯增高(P＜0.001)，不穩(wěn)定斑塊組FASmRNA的

13、表達(dá)（1.423±0.201）高于穩(wěn)定斑塊組(1.260±0.147)(P=0.037)。
　　 3.相關(guān)性分析顯示，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中E-FABP與FASmRNA的表達(dá)呈正相關(guān)（r不穩(wěn)定組mRNA=0.650，P=0.022;r穩(wěn)定組mRNA=0.778，P=0.014），而在對照組中兩者無相關(guān)性(r=0.120,P=0.696)。
　　 結(jié)論:
　　 1.人股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中E-FABP與FAS的表達(dá)上調(diào)。